高脂飲食致非酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、目的：非酒精性脂肪肝(non-alcohol fatty liver disease NAFLD)的發(fā)病率逐年上升，包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitisNASH)、肝纖維化和肝硬化，病情進(jìn)展致終末期肝病威脅人類健康。本文通過建立與人類NAFLD發(fā)病過程相似的NAFLD動(dòng)物模型，探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming growth factor-βi TGF-βi)、腫瘤壞死因

2、子(Tumor necrosis factor-α TNF-α)、脂聯(lián)素(Adiponectin)、過氧化氫酶(Catalase)等在高脂飲食所致NAFLD發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：40只雄性C57BL/6J小鼠正常飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為兩組：正常對(duì)照組、模型組，每組各20只。分別給予普通飼料和Lieber-DeCarli液連續(xù)喂養(yǎng)。從第3周起每周末每組各抽檢2只小鼠，檢測(cè)造模情況，造模至第5周末造模成功，隨即全部摘眼球取血

3、處死小鼠，并留取肝組織。用生化法檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)，血糖以及肝組織勻漿TG、TC，采用Elisa雙抗體夾心法檢測(cè)肝組織勻漿TNF-α、脂聯(lián)素。肝組織標(biāo)本冰凍切片行蘇丹Ⅲ染色，光鏡下評(píng)估肝組織脂肪交性程度。肝組織標(biāo)本石蠟切片，行蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下計(jì)算炎癥活動(dòng)度計(jì)分，行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TGF-βi、過氧化氫酶在肝臟的表達(dá)情況。
　　

4、結(jié)果：
　　 1．血清AST、ALT、TG、TC、血糖及肝組織TG、TC:①血清AST、ALT(IU/L)、血糖(mmol/L)：模型組AST、ALT分別為67.53±15.22、20.18±5.77，較正常對(duì)照組(48.70±8.95，3.31±4.47)明顯升高（P＜0.05），模型組血糖為11.22±1.04較正常對(duì)照組(7.78±1.39)顯著升高(P＜0.01)。②血清TG、TC(mmol/L):模型組TG為1.06±

5、0.43，較正常對(duì)照組(0.71±0.15)明顯升高(P＜0.05)，模型組TC為4.22±0.62，較正常對(duì)照組(2.32±0.63)顯著升高(P＜0.01)。③肝組織TG、TC(mg/g):模型組肝組織TG為254.94±87.87，較正常對(duì)照組(67.77±17.61)顯著升高(P＜0.01)，模型組肝組織TC為84.69±44.54，較正常對(duì)照組(40.62±21.33)明顯升高（P＜0.05）。
　　 2．脂肪變程度：

6、①蘇丹Ⅲ染色：正常組光鏡下肝細(xì)胞內(nèi)幾乎無(wú)脂滴，模型組光鏡下可見大量肝細(xì)胞內(nèi)有橘紅色脂滴顆粒。②HE染色：正常組光鏡下肝細(xì)胞未見脂肪空泡，模型組肝細(xì)胞普遍可見脂肪空泡。其肝組織脂肪變性程度與正常對(duì)照組相比有差異(P＜0.01)。
　　 3．炎癥反應(yīng)及相關(guān)因子：①HE染色：正常組肝組織基本無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組肝小葉內(nèi)出現(xiàn)匯管區(qū)炎癥，炎癥活動(dòng)度計(jì)分(4.31±1.08)顯著高于正常組(P＜0.01)。②肝組織TNF-α(pg/g)：

7、正常組肝組織TNF-α為49.47±11.14，模型組為60.71±10.52，較正常對(duì)照組明顯升高（P＜0.05）。③肝TGF-β1:免疫組織化學(xué)染色示正常對(duì)照組TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞極少，模型組陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞顯著增加(P＜0.01)，呈棕黃色顆粒。
　　 4．脂聯(lián)素、過氧化氫酶：①脂聯(lián)素(ng/g)：模型組肝組織脂聯(lián)素為9.54±1.60，較正常組(17.32±5.34)明顯降低（P＜0.05）。②過氧化氫酶：免疫組織化學(xué)染