腫瘤及凋亡細胞檢測的電化學(xué)生物傳感器研究.pdf

1、腫瘤的發(fā)生嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量，危及著人們的生命安全，實現(xiàn)腫瘤細胞及其生理活動的準(zhǔn)確、快速、簡便檢測，對于疾病的確診與治療具有非常重要的意義。目前，有關(guān)檢測方法已有一些報道，但普遍操作繁瑣費時、不易定量、儀器昂貴，且要求工作人員有較高的專業(yè)技能。本論文設(shè)計建立了幾種新型的生物傳感器，實現(xiàn)了目標(biāo)物的高靈敏、快速測定。主要內(nèi)容如下：
　　 (1)利用巰基自組裝技術(shù)制備了壓電核酸適體傳感器，建立了一種新的檢測人腦星形膠質(zhì)瘤細胞的方

2、法，同時研究了反應(yīng)體系的熱、動力學(xué)行為。研究結(jié)果表明：星形膠質(zhì)瘤細胞與壓電石英晶體上的核酸適體探針的結(jié)合行為很好地符合Langmuir方程，即它們之間的反應(yīng)是特異性反應(yīng)，反應(yīng)的結(jié)合常數(shù)為6.67×106M-1，25℃時反應(yīng)速率常數(shù)為1.05×105M-1·s-1。該傳感器響應(yīng)的線性范圍為1.55×103～3.64×104個/mL，線性回歸方程為△f =-41.6-1.32×10-2c，相關(guān)系數(shù)為0.997，可用于定性、定量檢測人腦星形膠

3、質(zhì)瘤細胞，從而為腫瘤的定級和診斷提供了依據(jù)。
　　 (2)通過巰基在金表面的混合自組裝，將腱肽蛋白c的核酸適體探針固定于金電極表面?；陔祀牡鞍自谀z質(zhì)瘤細胞表面的高表達，利用細胞與電極表面核酸適體探針的特異性生物識別對鐵氰化物電化學(xué)阻抗的抑制，建立了膠質(zhì)瘤細胞檢測的核酸適體傳感器?？疾炫c優(yōu)化了核酸適體/巰基丙酸混合自組裝比例、反應(yīng)時間、溫度和離子強度等對傳感器性能有顯著影響的分析條件，結(jié)果表明該傳感器的阻抗響應(yīng)與膠質(zhì)瘤細胞濃度呈

4、線性關(guān)系，線性范圍為100-50000個細胞/mL，檢測限可達50個細胞/mL。
　　 (3)基于巰基的自組裝和納米金放大技術(shù)，將磷脂酰絲氨酸(PS)的識別蛋白Annexin-V固定在金電極表面，構(gòu)建了Annexin-V修飾電極。實驗中將含PS的脂質(zhì)體與腫瘤細胞進行整合，構(gòu)建早期凋亡細胞模型；利用整合得到的早期凋亡細胞與電極表面Annexin-V蛋白的特異性生物識別對鐵氰化物電化學(xué)阻抗的抑制，構(gòu)建了檢測早期凋亡細胞的無標(biāo)記型電化