副雞禽桿菌指紋圖譜分型及aroA突變株構(gòu)建.pdf

1、副雞禽桿菌(Avibacteriumparagallinarum，Apg)是巴氏桿菌科的一種短小革蘭氏陰性桿菌，引起雞傳染性鼻炎，目前常用的Apg分型方法都是基于其血凝活性。由于該菌基因組序列未知，所以目前關(guān)于副雞禽桿菌相關(guān)毒力因子的研究甚少，主要集中在個別基因。
　　 本試驗以腸桿菌基因間共有重復(fù)序列(ERIC)和隨機核苷酸多態(tài)性片段(RAPD)為靶序列對副雞禽桿菌基因組進(jìn)行PCR擴增，對所得指紋圖譜用POPGENE和MEGA

2、4.0軟件進(jìn)行遺傳距離計算和聚類分析。結(jié)果顯示兩種方法均得到豐富、穩(wěn)定的指紋圖譜，其多態(tài)性為85.8％(18/21);10個國際標(biāo)準(zhǔn)株，血清C型疫苗株以及4個國內(nèi)分離株可分為11個譜型，聚為4類。劃分的11個譜型可以和現(xiàn)有分型方法中不同亞型一一對應(yīng)，提示這種方法可以區(qū)分不同血清亞型。
　　 本試驗以副雞禽桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)株145(C-3)為模板，用CODEHOP軟件設(shè)計針對aroA基因的兼并引物，并運用改進(jìn)的染色體步移技術(shù)擴增aro

3、A基因全長序列；對該核酸序列及其編碼蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究并與該菌其他血清型及相關(guān)細(xì)菌進(jìn)行序列比對和分子進(jìn)化分析。獲得了完整的aroA基因，全長1293bp。該基因編碼430個氨基酸，具有三個跨膜區(qū)和五個潛在抗原表位。不同血清型間氨基酸序列同源性為88.1％-100％，與其他同科細(xì)菌核酸同源性為74.2％以上。
　　 此外，我們還利用PCR技術(shù)擴增出Apg的C血清型aroA基因上下游大小約0.7kb的基因片段，并在其酶切位點插入大小約