左旋多巴干預(yù)兔激素性股骨頭壞死的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討激素性股骨頭壞死的發(fā)病機制及左旋多巴的干預(yù)作用。
   方法:健康成年中國大耳白兔36只,體重為2.5土0.6公斤,雌雄不限。隨機分為三組。A組:左旋多巴干預(yù)組,12只,經(jīng)耳緣靜脈注射10ug/Kg的LPS,24小時后于臀肌注射20mg/Kg MPS琥珀酸鈉,共3次,每次間隔24小時。注射完成后當(dāng)日開始口服左旋多巴,劑量0.4g/Kg/天。B組:模型組,12只,同A組建立模型,未予藥物干預(yù)。C組:對照組,12只,于相同

2、時間點注射等量生理鹽水,用于實驗對照。實驗期間每組動物均以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng),肌肉注射青霉素80萬u/只,2次/周,預(yù)防感染。制模后第2周、6周、8周分別采取每組實驗動物兔耳緣靜脈血2ml離心,收集上清,ELISA試劑盒測定血清中BALP、PINP含量水平;分別行雙側(cè)股骨近端(含股骨頭)骨密度測定。制模后第6周、8周采用空氣栓塞法各組分別處死實驗動物6只,處死前行雙髖X線片及MRI檢查,處死后取出雙側(cè)股骨頭標(biāo)本,觀察比較標(biāo)本大體形態(tài)變化后,用

3、10%福爾馬林液體浸泡固定后,經(jīng)脫鈣、包埋、切片后,HE染色,光鏡觀察骨小梁、骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等結(jié)構(gòu)變化。所得數(shù)據(jù)用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件包處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用完全隨機設(shè)計的方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計分析,各組之間采用LSD兩兩比較檢驗組間差異的顯著性,左旋多巴組、模型組在第2周、第6周、第8周動態(tài)變化情況采用隨機區(qū)組設(shè)計方差分析。
   結(jié)果:建模后第2周,左旋多巴干預(yù)組、模型組、對照組影像學(xué)檢查顯示雙側(cè)股骨頭無顯

4、著變化。第6周時,模型組股骨頭表面顏色發(fā)白、暗淡,無光澤,軟骨面毛糙,但尚完整;雙髖關(guān)節(jié)X片提示模型組12只動物有8只15個股骨頭內(nèi)骨質(zhì)不均勻,有點狀密度減低區(qū),骨小梁排列紊亂、模糊,股骨頭形狀完整,無塌陷。左旋多巴干預(yù)組股骨頭表面顏色仍較紅潤,軟骨面完整、光滑;X片示股骨頭形態(tài)完整,股骨頭內(nèi)骨小梁欠清晰,股骨頭內(nèi)骨密度略有升高,未見囊性變,關(guān)節(jié)間隙正常。第8周后,模型組股骨頭有程度不等的變形,軟骨面失去光滑表現(xiàn),部分可見軟骨面塌陷剝脫

5、凹痕,標(biāo)本切鋸時骨質(zhì)硬度減低,阻力較小,易于剖切;雙髖關(guān)節(jié)X線片示股骨頭有不同程度的形狀不規(guī)則,變平變小,股骨頭內(nèi)密度不均,略有塌陷,骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂,頭內(nèi)可見囊樣變,股骨近端骨質(zhì)較疏松,關(guān)節(jié)間隙略窄;MRI顯示股骨頭形狀不規(guī)則,關(guān)節(jié)面不平,有塌陷,關(guān)節(jié)間隙變窄,股骨頭上方鄰近關(guān)節(jié)處呈不均勻低信號分布,T1W1表現(xiàn)為細(xì)條狀,片狀低信號,T2WI表現(xiàn)為細(xì)條狀、片狀高信號/低信號,GESTIR序列股骨頭內(nèi)及干骺端表現(xiàn)為高信號骨髓水腫改變;HE

6、染色組織學(xué)觀察顯示骨小梁排列較散亂,萎縮變細(xì)、稀疏、部分?jǐn)嗔?,空骨陷窩顯著增多,骨小梁之間脂肪堆積,脂肪細(xì)胞體積增大,部分脂肪細(xì)胞互相融合,骨小梁內(nèi)正常骨細(xì)胞數(shù)量減少,較多的細(xì)胞核固縮、核偏位于一側(cè),骨小梁周圍成骨細(xì)胞少見。而左旋多巴干預(yù)組第8周時股骨頭顏色稍暗淡,表面完整,稍有毛糙,關(guān)節(jié)面無塌陷,剝脫,切鋸標(biāo)本時,阻力明顯較模型組大;雙髖關(guān)節(jié)x線片表現(xiàn)為股骨頭外形圓滑,無塌陷,股骨頭內(nèi)骨密度升高,未見囊性變及硬化骨,關(guān)節(jié)間隙正常;MR

7、I檢查股骨頭不變形,關(guān)節(jié)間隙正常,股骨頭上方鄰近關(guān)節(jié)處T1 WI可見細(xì)條狀低信號;T2WI表現(xiàn)為條狀、小片狀高信號/低信號,無軟骨下骨折發(fā)生;HE染色示骨小梁排列結(jié)構(gòu)尚規(guī)則,骨小梁較粗,連成網(wǎng)狀,小梁內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)目較多,脂肪細(xì)胞基本正常,未見明顯融合現(xiàn)象,髓腔內(nèi)生血細(xì)胞較多,骨細(xì)胞核大,較清晰,可見部分空骨陷窩。
   第2周左旋多巴干預(yù)組、模型組、對照組PINP差別不明顯。第6周左旋多巴干預(yù)組(1.73±0.22μg/L)與對照

8、組(1.57±0.13μg/L)相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),左旋多巴干預(yù)組與模型組(1.60±0.10μg/L,)相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),模型組與對照組相比有所升高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。第8周左旋多巴干預(yù)組(2.08±0.31μg/L)與對照組(1.61±0.28μg/L)、模型組(1.67±0.28μg/L)相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),模型組與對照組相比有所升高,但差

9、異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。左旋多巴組第8周、第6周PINP較第2周相比升高明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   BALP水平第2周左旋多巴組、模型組、對照組差別不明顯,無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。第6周左旋多巴干預(yù)組(1.49±0.09 U/L)與對照組(1.13±0.10 U/L)、模型組(1.21±0.08 U/L)相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),模型組與對照組相比有所升高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(

10、P>0.05)。治療后第8周左旋多巴干預(yù)組(1.70±0.07U/L)與對照組(1.18±0.25 U/L)相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),左旋多巴干預(yù)組與模型組(1.31±0.26 U/L)相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),模型組與對照組相比有所升高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。左旋多巴組第8周、第6周BALP較第2周相比升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   第2周左旋多巴組、模型組、對

11、照組股骨近端BMD值無顯著差別(P>0.05)。第6周模型組(0.272±0.017 g/cm2)與左旋多巴組(0.298±0.015 g/cm2)BMD值均有下降,與對照組(0.328±0.016 g/cm2)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);但模型組BMD值低于左旋多巴組,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。第8周左旋多巴組BMD值(0.312±0.014g/cm2)上升,但仍低于對照組(0.332±0.007 g/cm2),模型

12、組BMD值(0.263±0.006 g/cm2)進(jìn)行性下降,低于對照組與左旋多巴組,差異性有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   結(jié)論:
   1.短期內(nèi)單次低劑量內(nèi)毒素聯(lián)合3次大劑量糖皮質(zhì)激素,可成功誘導(dǎo)激素性股骨頭壞死,糖皮質(zhì)激素與股骨頭壞死的發(fā)生關(guān)系密切。
   2.激素性股骨頭壞死發(fā)病過程中,存在骨代謝的變化,早期檢測反映成骨細(xì)胞活性的骨轉(zhuǎn)換生化標(biāo)志物BALP及PINP水平變化能間接反映了機體骨形成及修復(fù)的

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