應用DF-1細胞和激流式生物反應器大規(guī)模增殖IBDV的研究.pdf

1、雞傳染性法氏囊病是由雞傳染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的雞和火雞的一種急性高度接觸性傳染病。目前,該病主要通過疫苗接種來防控。除給雛雞使用活疫苗免疫外,通常還給種雞注射滅活疫苗使雛雞獲得高的母源抗體,以保護其在生命早期不感染傳染性法氏囊病病毒。國內(nèi)雞傳染性法氏囊病滅活疫苗的生產(chǎn)通常采用雞胚成纖維細胞培養(yǎng)病毒液后制備而成。因雞傳染性法氏囊病毒在雞胚成纖維細胞上增殖滴度不高,需

2、要加大濃縮倍數(shù),增加生產(chǎn)成本,免疫效果差,所以在實踐中應用效果差。目前,國內(nèi)各大種雞場大多采用進口滅活疫苗。為了研究雞傳染性法氏囊病毒高效培養(yǎng)方法,本研究采用雞胚源DF-1細胞系代替?zhèn)鹘y(tǒng)的雞胚成纖維細胞,用激流式生物反應器紙片載體代替?zhèn)魍ǖ牟ＡмD瓶培養(yǎng)雞傳染性法氏囊病毒,為生產(chǎn)上提供一種優(yōu)質、高效的法氏囊滅活疫苗,以滿足市場的需要。研究結果如下:
　　 1.通過對DF-1細胞傳代、復蘇及凍存方法、培養(yǎng)條件等特性進行研究,確定了D

3、F-1細胞的最佳培養(yǎng)條件。DF-1細胞可在37℃條件下培養(yǎng),培養(yǎng)基為DMEM/F12,生長期的培養(yǎng)基中加入10％的胎牛血清最好,細胞復蘇時應采用換液而不能采取離心的方法。
　　 2.通過在方瓶中對雞傳染性法氏囊病毒HQ株在DF-1細胞上的適應及增殖條件進行優(yōu)化,結果表明,雞傳染性法氏囊病毒HQ毒在DF-1細胞上具有很好的適應性,而在Vero細胞上適應性差。雞傳染性法氏囊病毒在DF-1細胞上增殖的最佳pH為7.0,最佳維持液血清含

4、量為2％,最佳接毒時間為細胞傳代后72h,最佳接毒量的MOI為0.8(TCID50/細胞),最佳收毒時間為接種后36h。這為IBDV在生物反應器大規(guī)模培養(yǎng)技術的研究提供了參考依據(jù)。
　　 3.對應用AP10和AP20激流式生物反應器和紙片載體增殖IBDV的條件進行優(yōu)化,試驗結果表明,反應器中IBDV增殖的最適pH為7.0-7.2,37℃最適合細胞與病毒的增殖,AP10激流式生物反應器最佳的細胞接種數(shù)量為3×109個,MOI為0.

5、9(TCID50/細胞),當細胞的糖耗下降至接近零時為最佳收病毒時間,IBDV在反應器中的毒價可達到109.5TCID50·mL-1。
　　 本研究在國內(nèi)首次采用DF-1細胞系代替雞胚或其原代成纖維細胞培養(yǎng)IBDV,并首次采用激流式生物反應器和紙片載體代替轉瓶大量增殖DF-1細胞進行IBDV的大規(guī)模培養(yǎng),使IBDV的毒價由在轉瓶成纖維細胞上培養(yǎng)時的107.5TCID50·mL-1上升至目前的109.5TCID50·mL-1,提高