亞麻籽油對(duì)保護(hù)高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1．在能量攝入一致的前提下，探討亞麻籽油顯著改善高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗的適宜攝入量；
　　2．基于脂質(zhì)組學(xué)方法，探討亞麻籽油介導(dǎo)的n-3多不飽和脂肪酸（n-3 polyunsaturated fatty acids, n-3PUFA）狀態(tài)與高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗關(guān)系；
　　3．從肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)、線粒體損傷及自噬功能紊亂的角度探討亞麻籽油改善高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的分子機(jī)制。
　　方法：
　

2、　1.分組：80只體重為18–20 g的雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為5組：低脂對(duì)照組（2.4％玉米油+1.9%豬油）、高脂模型組（3.2%玉米油+31.9%豬油）、低（10%亞麻籽油+21.9%豬油+3.2%玉米油）、中（20%亞麻籽油+11.9%豬油+3.2%玉米油）和高劑量亞麻籽油替代組（30%亞麻籽油+1.9%豬油+3.2%玉米油）。其中，低脂對(duì)照組脂肪供能比為10%，其它各高脂組脂肪供能比為60%。喂養(yǎng)16周建立高脂誘導(dǎo)的胰

3、島素抵抗模型。
　　2.測定指標(biāo)： ELISA法和酶學(xué)比色法測定血清炎性細(xì)胞因子、空腹胰島素水平、空腹血糖、肝甘油三酯（Triglyceride，TG）和總膽固醇（Total Cholesterol，TC）水平；肝臟固定后用于HE染色；肝組織冰凍切片孵育DHE熒光探針檢測肝臟活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平；硫代巴比妥酸比色法和改良二硫代二硝基苯甲酸比色法分別測定肝臟丙二醛（Malondiald

4、ehyde，MDA）和谷胱甘肽（Glutathione，GSH）的水平；采用固相微萃取及氣相色譜法測定血清及肝組織總的及亞脂質(zhì)成分包括TG、膽固醇酯（Cholesteryl ester，CE）、甘油二酯（Diglyceride，DG）、游離脂肪酸（Free fatty acid，F(xiàn)FA）、磷脂（Phospholipid，PL）脂肪酸組成；采用差速離心法獲得肝細(xì)胞膜和線粒體，并對(duì)膜脂質(zhì)進(jìn)行提取、固相微萃取和膜脂肪酸組成的測定；透射電鏡觀察

5、肝線粒體超微結(jié)構(gòu)變化以及線粒體自噬狀態(tài)；采用熒光探針JC-1及氧電極法測定肝線粒體膜電位及呼吸控制率；Western blot測定肝胰島素信號(hào)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)、JNK、線粒體自噬及生物合成調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各實(shí)驗(yàn)組小鼠平均能量攝入無顯著差異（LFD組除外）。中、高劑量亞麻籽油干預(yù)能夠顯著抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠體重、肝體比及睪周脂肪體重比的增加、改善系統(tǒng)水平的胰島素抵抗。
　　2.亞麻籽油

6、干預(yù)能夠抑制高脂誘導(dǎo)的血清炎性因子水平的增加，尤其是以MCP-1的降低最為顯著。
　　3.長期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠嚴(yán)重的肝脂肪變及氧化損傷。其中，肝脂質(zhì)沉積主要以TG的增加為主（+88%）。中、高劑量亞麻籽油干預(yù)能夠顯著改善這一變化。
　　4.中、高劑量亞麻籽油干預(yù)顯著上調(diào)急性胰島素刺激狀態(tài)下 p-Ser473Akt、p-Tyr632IRS-1和p-Ser2448 mTOR蛋白表達(dá)水平，表明改善的肝組織胰島素信號(hào)。
　　5

7、.亞麻籽油干預(yù)能夠抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠血清飽和脂肪酸（Saturated fatty acid，SFA）和n-6PUFA增加，并進(jìn)一步降低單不飽和脂肪酸（Monounsaturated fatty acid，MUFA）水平，增加n-3PUFA累積，降低n-6/n-3比值，且具有劑量效應(yīng)關(guān)系。亞麻籽油對(duì)肝組織脂肪組成的影響則表現(xiàn)出類似的變化趨勢(shì)。
　　6.亞麻籽油劑量依賴性地抑制高脂誘導(dǎo)的血清TG、CE和FFA水平的增加，但對(duì)DG和P

8、L含量無顯著影響。亞麻籽油介導(dǎo)的n-3PUFA累積具有脂質(zhì)成分特異性。其中，α-亞麻酸（α-linolenic acid，ALA）、二十碳五烯酸（Eicosapetaenoic acid，EPA）、二十二碳五烯酸（Docosapentaenoic acid，DPA）及二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，DHA）能夠特異性地累積在TG、FFA和CE脂質(zhì)池中；ALA和EPA累積與亞麻籽油的攝入量呈正比；各干預(yù)組DPA含

9、量無顯著差異；中、高劑量亞麻籽油攝入對(duì)DHA累積具有反饋抑制作用。肝組織脂質(zhì)組學(xué)則表現(xiàn)出與血清類似的的分析結(jié)果。
　　7.長期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞膜脂質(zhì)重塑。其中，n-3PUFA水平顯著增加，MUFA含量和 n-6/n-3比值顯著降低。亞麻籽油干預(yù)顯著降低亞油酸（Linoleic acid, LA）來源的C20:4n-6和C22:4n-6水平，但增加LA、ALA及ALA來源的EPA和DPA累積。
　　8.相關(guān)性分析結(jié)果表明

10、，亞麻籽油顯著改善系統(tǒng)水平胰島素抵抗可能基于ALA、EPA和DPA在血清特定脂質(zhì)成分累積及協(xié)同增效作用。其中，F(xiàn)FA/CE-ALA和EPA，TG-ALA、EPA和DPA以及DG-ALA與亞麻籽油介導(dǎo)的胰島素敏感性增加呈顯著正相關(guān)關(guān)系。
　　9.中劑量亞麻籽油攝入顯著抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及未折疊蛋白反應(yīng)的失活，上調(diào)JNK表達(dá)及磷酸化水平，并伴隨著肝胰島素敏感性的改善。
　　10.中、高劑量亞麻籽油干預(yù)一方面抑制高脂誘

11、導(dǎo)的肝線粒體結(jié)構(gòu)損傷，增加ALA、DPA及DHA在膜磷脂中的累積，降低n-6/n-3比值，改善線粒體膜電位及呼吸控制率；另一方面，中、高劑量亞麻籽油干預(yù)上調(diào)線粒體自噬水平和生物合成調(diào)控，改善肝線粒體穩(wěn)態(tài)失衡。
　　結(jié)論：
　　1.亞麻籽油能夠通過抑制高脂誘導(dǎo)的肝脂肪變，氧化損傷及胰島素信號(hào)異常，改善系統(tǒng)水平的炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗。其中，中劑量亞麻籽油干預(yù)已經(jīng)表現(xiàn)出良好的拮抗效應(yīng)。
　　2.中、高劑量亞麻籽油介導(dǎo)的ALA