亞麻籽油對(duì)保護(hù)高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1．在能量攝入一致的前提下，探討亞麻籽油顯著改善高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗的適宜攝入量；
　　2．基于脂質(zhì)組學(xué)方法，探討亞麻籽油介導(dǎo)的n-3多不飽和脂肪酸（n-3 polyunsaturated fatty acids, n-3PUFA）狀態(tài)與高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗關(guān)系；
　　3．從肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)、線(xiàn)粒體損傷及自噬功能紊亂的角度探討亞麻籽油改善高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的分子機(jī)制。
　　方法：
　

2、　1.分組：80只體重為18–20 g的雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為5組：低脂對(duì)照組（2.4％玉米油+1.9%豬油）、高脂模型組（3.2%玉米油+31.9%豬油）、低（10%亞麻籽油+21.9%豬油+3.2%玉米油）、中（20%亞麻籽油+11.9%豬油+3.2%玉米油）和高劑量亞麻籽油替代組（30%亞麻籽油+1.9%豬油+3.2%玉米油）。其中，低脂對(duì)照組脂肪供能比為10%，其它各高脂組脂肪供能比為60%。喂養(yǎng)16周建立高脂誘導(dǎo)的胰

3、島素抵抗模型。
　　2.測(cè)定指標(biāo)： ELISA法和酶學(xué)比色法測(cè)定血清炎性細(xì)胞因子、空腹胰島素水平、空腹血糖、肝甘油三酯（Triglyceride，TG）和總膽固醇（Total Cholesterol，TC）水平；肝臟固定后用于HE染色；肝組織冰凍切片孵育DHE熒光探針檢測(cè)肝臟活性氧（Reactive oxygen species，ROS）水平；硫代巴比妥酸比色法和改良二硫代二硝基苯甲酸比色法分別測(cè)定肝臟丙二醛（Malondiald

4、ehyde，MDA）和谷胱甘肽（Glutathione，GSH）的水平；采用固相微萃取及氣相色譜法測(cè)定血清及肝組織總的及亞脂質(zhì)成分包括TG、膽固醇酯（Cholesteryl ester，CE）、甘油二酯（Diglyceride，DG）、游離脂肪酸（Free fatty acid，F(xiàn)FA）、磷脂（Phospholipid，PL）脂肪酸組成；采用差速離心法獲得肝細(xì)胞膜和線(xiàn)粒體，并對(duì)膜脂質(zhì)進(jìn)行提取、固相微萃取和膜脂肪酸組成的測(cè)定；透射電鏡觀察

5、肝線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)變化以及線(xiàn)粒體自噬狀態(tài)；采用熒光探針JC-1及氧電極法測(cè)定肝線(xiàn)粒體膜電位及呼吸控制率；Western blot測(cè)定肝胰島素信號(hào)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)、JNK、線(xiàn)粒體自噬及生物合成調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各實(shí)驗(yàn)組小鼠平均能量攝入無(wú)顯著差異（LFD組除外）。中、高劑量亞麻籽油干預(yù)能夠顯著抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠體重、肝體比及睪周脂肪體重比的增加、改善系統(tǒng)水平的胰島素抵抗。
　　2.亞麻籽油

6、干預(yù)能夠抑制高脂誘導(dǎo)的血清炎性因子水平的增加，尤其是以MCP-1的降低最為顯著。
　　3.長(zhǎng)期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠嚴(yán)重的肝脂肪變及氧化損傷。其中，肝脂質(zhì)沉積主要以TG的增加為主（+88%）。中、高劑量亞麻籽油干預(yù)能夠顯著改善這一變化。
　　4.中、高劑量亞麻籽油干預(yù)顯著上調(diào)急性胰島素刺激狀態(tài)下 p-Ser473Akt、p-Tyr632IRS-1和p-Ser2448 mTOR蛋白表達(dá)水平，表明改善的肝組織胰島素信號(hào)。
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7、.亞麻籽油干預(yù)能夠抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠血清飽和脂肪酸（Saturated fatty acid，SFA）和n-6PUFA增加，并進(jìn)一步降低單不飽和脂肪酸（Monounsaturated fatty acid，MUFA）水平，增加n-3PUFA累積，降低n-6/n-3比值，且具有劑量效應(yīng)關(guān)系。亞麻籽油對(duì)肝組織脂肪組成的影響則表現(xiàn)出類(lèi)似的變化趨勢(shì)。
　　6.亞麻籽油劑量依賴(lài)性地抑制高脂誘導(dǎo)的血清TG、CE和FFA水平的增加，但對(duì)DG和P

8、L含量無(wú)顯著影響。亞麻籽油介導(dǎo)的n-3PUFA累積具有脂質(zhì)成分特異性。其中，α-亞麻酸（α-linolenic acid，ALA）、二十碳五烯酸（Eicosapetaenoic acid，EPA）、二十二碳五烯酸（Docosapentaenoic acid，DPA）及二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，DHA）能夠特異性地累積在TG、FFA和CE脂質(zhì)池中；ALA和EPA累積與亞麻籽油的攝入量呈正比；各干預(yù)組DPA含

9、量無(wú)顯著差異；中、高劑量亞麻籽油攝入對(duì)DHA累積具有反饋抑制作用。肝組織脂質(zhì)組學(xué)則表現(xiàn)出與血清類(lèi)似的的分析結(jié)果。
　　7.長(zhǎng)期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞膜脂質(zhì)重塑。其中，n-3PUFA水平顯著增加，MUFA含量和 n-6/n-3比值顯著降低。亞麻籽油干預(yù)顯著降低亞油酸（Linoleic acid, LA）來(lái)源的C20:4n-6和C22:4n-6水平，但增加LA、ALA及ALA來(lái)源的EPA和DPA累積。
　　8.相關(guān)性分析結(jié)果表明

10、，亞麻籽油顯著改善系統(tǒng)水平胰島素抵抗可能基于ALA、EPA和DPA在血清特定脂質(zhì)成分累積及協(xié)同增效作用。其中，F(xiàn)FA/CE-ALA和EPA，TG-ALA、EPA和DPA以及DG-ALA與亞麻籽油介導(dǎo)的胰島素敏感性增加呈顯著正相關(guān)關(guān)系。
　　9.中劑量亞麻籽油攝入顯著抑制高脂誘導(dǎo)的小鼠肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及未折疊蛋白反應(yīng)的失活，上調(diào)JNK表達(dá)及磷酸化水平，并伴隨著肝胰島素敏感性的改善。
　　10.中、高劑量亞麻籽油干預(yù)一方面抑制高脂誘

11、導(dǎo)的肝線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)損傷，增加ALA、DPA及DHA在膜磷脂中的累積，降低n-6/n-3比值，改善線(xiàn)粒體膜電位及呼吸控制率；另一方面，中、高劑量亞麻籽油干預(yù)上調(diào)線(xiàn)粒體自噬水平和生物合成調(diào)控，改善肝線(xiàn)粒體穩(wěn)態(tài)失衡。
　　結(jié)論：
　　1.亞麻籽油能夠通過(guò)抑制高脂誘導(dǎo)的肝脂肪變，氧化損傷及胰島素信號(hào)異常，改善系統(tǒng)水平的炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗。其中，中劑量亞麻籽油干預(yù)已經(jīng)表現(xiàn)出良好的拮抗效應(yīng)。
　　2.中、高劑量亞麻籽油介導(dǎo)的ALA