針刺治療高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖C57BL-6小鼠胰島素抵抗的效應(yīng)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)研究針刺對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖C57BL/6小鼠胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)和肝臟中NLRP3炎癥小體活化及其下游白細(xì)胞介素1(IL-1β)等炎癥因子的表達(dá)水平的影響，為臨床針刺調(diào)節(jié)肥胖及胰島素抵抗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并探討針刺調(diào)節(jié)胰島素抵抗的作用機(jī)理。
　　方法：
　　將50只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)抽取10只做為正常組，其余40只給予持續(xù)高脂飲食16周。分別在0周、4周、8周、12周、16周、20周、24周記錄小鼠體重

2、。在第16周結(jié)束時(shí)，檢測(cè)小鼠空腹血糖（FPG）、空腹胰島素（FINS），并計(jì)算其胰島素敏感性指數(shù)（ISI）。與正常組比較，當(dāng)模型組小鼠ISI比正常組明顯降低（P<0.05），視為造模成功。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為3組，分別為模型組、非穴位組、穴位組，每組各10只小鼠，繼續(xù)給予持續(xù)高脂飲食喂養(yǎng)8周，同時(shí)正常組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)8周。穴位組和非穴位組從第17周開(kāi)始針刺治療，每日一次，每次10min，連續(xù)治療8周。穴位組選取小鼠“關(guān)元”、雙

3、側(cè)“足三里”、雙側(cè)“胰俞”穴進(jìn)行針刺。非穴位組選取尾部非穴位（取小鼠尾部距尾跟部0.5cm和1cm各一點(diǎn)）針刺。末次治療后第二天檢測(cè)各組小鼠空腹血糖并進(jìn)行腹腔糖耐量試驗(yàn)（IPGTT），比較各組小鼠糖耐量。末次治療后第四天進(jìn)行胰島素耐量試驗(yàn)（ITT），比較各組小鼠胰島素耐量。末次治療后第五天取材：取血清用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組小鼠血清總膽固醇（TC）和甘油三脂（TG）；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)各組小鼠血清中瘦素（Leptin）、

4、胰島素（Insulin）的分泌情況；用HE染色法觀察各組小鼠肝臟和脂肪組織的形態(tài)學(xué)變化；免疫印跡實(shí)驗(yàn)(WB)檢測(cè)各組小鼠肝臟中NLRP3、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）及其剪切體(p20)、白介素1前體（Pro-IL-1β）及白介素1（IL-1β）的表達(dá)；免疫組化法（IH）檢測(cè)肝臟中NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.造模結(jié)果：持續(xù)高脂

5、飼料喂養(yǎng)的小鼠與持續(xù)普通飼料喂養(yǎng)的小鼠相比，16周后體重明顯上升（P<0.05），胰島素敏感性指數(shù)明顯降低（P<0.05）。
　　2．ITT和IPGTT結(jié)果顯示：模型組與正常組相比，血糖水平明顯上升（P<0.05），糖耐量和胰島素耐量均表現(xiàn)異常；穴位組與模型組相比，血糖水平降低(P<0.05)，糖耐量和胰島素耐量有所改善；非穴位組與模型組相比，血糖水平降低不明顯，糖耐量和胰島素耐量改善較小。
　　3．生化結(jié)果顯示：與正常組比

6、較，模型組TG、TC明顯上升（P<0.05）；與模型組比較，穴位組TG、TC明顯下降（P<0.05），非穴位組TG、TC下降不明顯。
　　4.ELISA結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組血清瘦素水平和胰島素水平明顯上升（P<0.05）；與模型組比較，穴位組血清瘦素水平和胰島素水平明顯下降（P<0.05），非穴位組血清瘦素和胰島素下降不明顯（P>0.05）。
　　5.HE染色結(jié)果顯示：正常組脂肪組織呈蜂窩狀結(jié)構(gòu)，由大量單泡脂肪細(xì)胞

7、構(gòu)成，脂肪細(xì)胞呈多邊形或圓形，呈空泡狀；模型組脂肪細(xì)胞明顯增大且脂肪細(xì)胞大小不規(guī)則，細(xì)胞間隙變大；穴位組脂肪細(xì)胞變小，細(xì)胞間隙變?。环茄ㄎ唤M脂肪細(xì)胞大小及細(xì)胞間隙變化不明顯。正常組肝細(xì)胞排列緊密，沒(méi)有明顯的肝臟脂肪變性；模型組肝臟排列疏松，包漿內(nèi)有大小不一的脂滴，穴位組肝臟脂肪變性明顯減少，肝細(xì)胞的損傷程度與模型組相比有所改善；非穴位組肝臟細(xì)胞仍然排列較為疏松，包漿內(nèi)存在大小不一的脂滴。
　　6.WB結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組

8、肝臟NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表達(dá)明顯上升（P<0.05）；與模型組比較，穴位組肝臟NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表達(dá)明顯降低（P<0.05），非穴位組肝臟NLRP3、ASC、p20及IL-1β的變化無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　7.IH結(jié)果顯示：模型組與正常組比較，肝臟NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表達(dá)明顯上升；與模型組比較，穴位組肝臟NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表達(dá)明顯降低,

9、非穴位組肝臟NLRP3、ASC、p20及IL-1β的變化無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.連續(xù)16周高脂飲食喂養(yǎng)C57BL／6小鼠可成功誘導(dǎo)小鼠胰島素抵抗模型。
　　2.針刺可降低高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖C57BL／6小鼠的體重、血糖、TG、TC、Leptin、Insulin水平，改善胰島素抵抗模型小鼠胰島素耐量及糖耐量，達(dá)到對(duì)肥胖和胰島素抵抗的良性調(diào)節(jié)作用。
　　3.針刺能降低高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖C57BL／6小鼠肝