重癥急性胰腺炎各階段TLR4及CD4+CD25highTreg細(xì)胞的水平及其意義探討.pdf

1、目的：
　　 重癥急性胰腺炎(SAP)是一種特殊類型的外科急腹癥，起病急、病情重、致殘率及病死率高、醫(yī)療費(fèi)用昂貴，危害廣大人民身心健康，成為多年來(lái)醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)及外科治療的難點(diǎn)。其發(fā)病機(jī)制目前認(rèn)為，胰酶在腺泡細(xì)胞的異常激活導(dǎo)致了炎癥介質(zhì)瀑布樣釋放，其損傷超越了胰腺局部而導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)。過(guò)度的炎癥反應(yīng)可以導(dǎo)致機(jī)體抗炎機(jī)制的激活，其目的是對(duì)抗炎癥反應(yīng)造成的潛在損害。只是在炎癥的不同階段促炎反應(yīng)和抗炎反應(yīng)主次不同。總體來(lái)看，SAP

2、病程發(fā)展有三個(gè)階段，SAPⅠ期，即全身炎癥反應(yīng)綜合癥（SIRS）期，在發(fā)病2周內(nèi)，此期炎癥因子“瀑布樣釋放”，機(jī)體處于高度應(yīng)激狀態(tài)，導(dǎo)致嚴(yán)重代謝紊亂和內(nèi)環(huán)境失衡，易出現(xiàn)多器官功能不全綜合癥（MODS）；SAP Ⅱ期，即SIRS下調(diào)期，在發(fā)病2-4周內(nèi)，患者腹內(nèi)壓及腹脹癥狀大幅緩解，體溫、脈搏及呼吸等生命征較SIRS期平穩(wěn)，WBC計(jì)數(shù)也明顯下降；SAPⅢ期，即感染相關(guān)并發(fā)癥期，在發(fā)病4周后，表現(xiàn)為患者出現(xiàn)感染、出血、消化道瘺等嚴(yán)重并發(fā)癥。

3、
　　 Toll樣受體（TLRs）是啟動(dòng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵受體，研究發(fā)現(xiàn)，TLR4作為其最早鑒定的成員，可以激發(fā)SIRS樣反應(yīng)；TLR4在鼠急性胰腺炎病理生理及病情嚴(yán)重程度方面起著重要作用。利用TLR4野生型小鼠及突變型小鼠制作急性胰腺炎模型，發(fā)現(xiàn)缺乏TLR4 或CD14 受體時(shí)，急性胰腺炎的嚴(yán)重度減輕。然而，TLR4是否與人SAP相關(guān)，在SAP發(fā)病中起何種作用并不清楚。另外，研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4+CD2

4、5+Treg）表面TLR4的活化可能激活該細(xì)胞的抑制功能。
　　 CD4+CD25+Treg是具有負(fù)向免疫調(diào)控作用的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，組成性表達(dá)IL-2受體α鏈（CD25，）被認(rèn)為在抑制自身免疫性疾病的進(jìn)展、控制潛在有害的炎癥反應(yīng)及維持免疫穩(wěn)態(tài)等方面起了關(guān)鍵性的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞在鼠SIRS模型中數(shù)量及活性均增強(qiáng)，抑制SIRS過(guò)度的炎性反應(yīng)。人CD4+CD25+Treg細(xì)胞與鼠Treg有同源性，但是僅1％-2％高表達(dá)

5、CD25的CD4+T細(xì)胞亞群（CD4+CD25high T cells）展示了抑制活性。體外研究顯示，CD4+CD25high Treg細(xì)胞可抑制CD4+CD25-T細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子IFN-γ和IL-13的分泌；高表達(dá)誘導(dǎo)性共刺激分子（ICOS）分子的CD4+CD25high Treg細(xì)胞誘導(dǎo)了Th2細(xì)胞及其細(xì)胞因子IL-4、IL-5的產(chǎn)生。但是Treg在人SAP中的作用未見(jiàn)報(bào)道。本研究目的是檢測(cè)SAP患者各階段外周血TLR4及Tre

6、g的水平，并探討其意義。
　　 方法：
　　 以2008年8月到2009年6月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院胰腺外科收住院的42例重癥急性胰腺炎患者為研究對(duì)象，對(duì)照組為同期住院的38例急性輕型胰腺炎（MAP）患者；然后對(duì)各階段SAP患者及相應(yīng)對(duì)照組進(jìn)行急性生理學(xué)和慢性健康狀況評(píng)分（APACHEⅡ評(píng)分）、TLR4水平、CD4+CD25highTreg細(xì)胞百分率、Foxp3百分率、IFN-γ、IL-4及IL-10水平比較

7、；其中，外周血TLR4基因水平（TLR4mRNA）采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，TLR4蛋白、CD4+CD25highTreg細(xì)胞百分率及Foxp3百分率采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，IFN-γ、IL-4及IL-10水平采用ELISA檢測(cè)，并對(duì)以上指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.APACHEⅡ分值在SAPⅠ期（16.85±3.23）最高，SAPⅡ期有所下降（8.51±1.15），在SAPⅢ期降至最低（4.58±2.09），

8、且SAPⅠ期、SAPⅡ期及SAPⅢ期兩兩相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，SAPⅠ期及SAPⅡ期分值明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但在SAPⅢ期,分值與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 2.TLR4mRNA(TLR4/actin)相對(duì)值在SAPⅠ期（3.04±0.87）最高，SAPⅡ期有所下降（1.96±0.31），在SAPⅢ期降至最低（1.38±0.58），且SAPⅠ期、

9、SAPⅡ期及SAPⅢ期兩兩相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，SAP各期TLR4mRNA相對(duì)值明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3.TLR4蛋白表達(dá)在SAPⅠ期（79.17％±11.05％）最高，SAPⅡ期有所下降（19.67％±8.31％），在SAPⅢ期降至最低（8.58％±4.58％），且SAPⅠ期、SAPⅡ期及SAPⅢ期兩兩相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，S

10、AP各期TLR4蛋白水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 直線相關(guān)性分析表明，TLR4mRNA與APACHEⅡ評(píng)分成正相關(guān)，r=0.898,P<0.01。
　　 4.CD4+CD25highTreg細(xì)胞百分率（CD4+CD25highTreg/CD4+T）在SAPⅠ期開(kāi)始升高（1.37％±1.12％），SAPⅡ期較高（3.12％±1.21％），SAPⅢ期升至最高（4.47％±1.04％），且SAPⅠ期、

11、SAPⅡ期及SAPⅢ期兩兩相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，SAP各期CD4+CD25highTreg細(xì)胞百分率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 5. Foxp3百分率（CD4+CD25highFoxp3+Treg/CD4+CD25highTreg比值）在SAP患者各期兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 6. IL-10水平在SAP患者各期兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

12、義（P>0.05）。
　　 7. IFN-γ水平在SAPⅠ期最高（978.57±213.29），Ⅱ期降低（571.43±157.14），在Ⅲ期降至最低（357.14±150.00），且SAPⅠ期、SAPⅡ期及SAPⅢ期兩兩相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，SAP各期IFN-γ水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 直線相關(guān)性分析表明，CD4+CD25highTreg細(xì)胞比例與IFN

13、-γ水平成負(fù)相關(guān)，r=-0.895，P<0.01。
　　 8. IL-4水平在SAPⅠ期（22.92±4.17）開(kāi)始升高，Ⅱ期更高（35.42±12.50，P<0.05）,在Ⅲ期升至最高（76.04±14.58，P<0.05），且SAPⅠ期、SAPⅡ期及SAPⅢ期兩兩相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與對(duì)照組相比，SAP各期IL-4水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。直線相關(guān)性分析表明，CD4+CD25hi