超聲波對β-乳球蛋白結(jié)構(gòu)、免疫特性和美拉德反應(yīng)的影響.pdf

1、β-乳球蛋白（β-lactoglobulin,β-Lg）是牛乳中的一種優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，氨基酸比例佳，支鏈氨基酸高，且具有與小分子疏水性配體（如視黃醇、脂肪酸等）結(jié)合的能力。但β-Lg同時也是牛乳中的主要過敏原，嚴(yán)重影響著消費(fèi)者對牛奶中營養(yǎng)成分的攝取，極大地威脅著過敏人群尤其是嬰幼兒的身體健康和生長發(fā)育。因此，如何降低和消除β-Lg的致敏性成為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。本文以β-Lg為研究對象，通過制備抗β-Lg多克隆抗體，建立檢測牛乳過敏原β-Lg

2、抗原性的間接競爭酶聯(lián)免疫（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法。并且采用超聲波和超聲波結(jié)合美拉德反應(yīng)對β-Lg進(jìn)行改性，研究了改性前后β-Lg結(jié)構(gòu)、抗原性、IgE結(jié)合能力以及功能性質(zhì)之間的變化，結(jié)果表明：
　　1．采用靜脈注射的免疫方法，對日本大耳兔進(jìn)行免疫，獲得了兔抗β-Lg血清，采用間接ELISA方法檢測抗β-Lg血清的效價(jià)和western blotting實(shí)驗(yàn)檢測血清的特異性，

3、發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)獲得了效價(jià)高（1:1638400）、特異性好的抗β-Lg血清。采用方正滴定法確定間接競爭 ELISA方法的工作條件：抗原包被濃度2μg/mL，抗血清稀釋倍數(shù)1:102400，酶標(biāo)二抗的稀釋倍數(shù)為1:20000，并且得到回歸方程Y=-42.82X+79.62，相關(guān)系數(shù)R2=0.9938，最佳檢測范圍為0.5~64μg/mL。
　　2.超聲波處理不會改變β-Lg的分子量；超聲波處理使β-Lg的β-折疊含量增加，無規(guī)則卷曲含量

4、減少，并且β-折疊的百分含量隨超聲波處理時間和功率的增加呈先增加后降低的趨勢，而無規(guī)則卷曲則呈先降低后增加的趨勢；經(jīng)超聲波處理后，β-Lg的自由巰基含量降低，表面疏水性均增加且隨超聲時間和超聲功率的增加呈先增加后降低的趨勢，并在400W15min時達(dá)到最大，H0為1945；抗原性隨著超聲波強(qiáng)度的增大呈先增加后降低的趨勢，IgE結(jié)合能力變化不顯著。
　　3.超聲波結(jié)合美拉德反應(yīng)使β-Lg的自由氨基含量顯著下降，分子量向高分子移動，且