基于修飾介孔硅材料負(fù)載的免標(biāo)記電化學(xué)多組分免疫檢測(cè).pdf

1、本論文通過引入納米金膠粒子、離子液體、介孔二氧化硅等納米材料，采用新型的免標(biāo)記方法制備多組分電化學(xué)免疫傳感器，用于兩種腫瘤標(biāo)志物的同時(shí)免疫檢測(cè)。主要研究工作如下:
　　1.本文制備了具有不同孔徑的功能介孔二氧化硅材料MPS及多種修飾介孔材料。在合成過程中，通過改變擴(kuò)孔劑TMB的用量，制備具有不同孔徑的介孔二氧化硅材料MPS，繼而對(duì)介孔MPS內(nèi)外壁進(jìn)行修飾制備功能介孔材料。采用硼氫化鈉還原法將金納米粒子固定在介孔材料孔道內(nèi)制備了修飾

2、介孔硅材料GNPs/MPS。此外，本文合成了巰基乙酸修飾的硫化鎘量子點(diǎn)CdSQDs及硒化鎘量子點(diǎn)CdSeQDs，并制備得到以上兩種量子點(diǎn)分別修飾的介孔材料。采用本文制備的介孔材料的孔道來構(gòu)筑免標(biāo)記型通道生物傳感器將會(huì)拓寬介孔材料的應(yīng)用范圍，并且大大降低傳統(tǒng)離子通道傳感器中納米孔道的制備難度和成本，提高通道傳感器制備的重現(xiàn)性。
　　2.本文建立了一種可同時(shí)檢測(cè)雙組份腫瘤標(biāo)志物的免標(biāo)記電化學(xué)免疫測(cè)定方法，檢測(cè)了人血清樣品中癌胚抗原(C

3、EA)和甲胎蛋白(AFP)的含量。在實(shí)驗(yàn)中，我們首先將二種電化學(xué)底物，亞甲基藍(lán)(MB)和巰基二茂鐵(FeC)，分別結(jié)合在金納米粒子(GNPs)修飾的介孔硅(MPS)的孔道內(nèi)，制備MB-GNPs-MPS和FeC-GNPs-MPS復(fù)合材料;然后將CEA單克隆抗體(anti-CEA)和AFP單克隆抗體(anti-AFP)分別負(fù)載到兩種材料的孔內(nèi)，制得CEA和AFP的免標(biāo)記免疫探針(anti-CEA/MB-GNPs-MPS，anti-AFP/F

4、eC-GNPs-MPS);最后將免疫探針涂覆在摻銦氧化錫(ITO)電極表面的不同部分，組裝得到雙組分的免標(biāo)記免疫傳感器。當(dāng)該免疫傳感器在含有抗原的樣液中溫育后，CEA和AFP抗愿通過特異性免疫反應(yīng)而結(jié)合到MPS孔道內(nèi)。由于形成的免疫復(fù)合物不導(dǎo)電且有一定的空間位阻，所以對(duì)電極表面的電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了阻礙。根據(jù)ITO不同位置上響應(yīng)電流的變化實(shí)現(xiàn)對(duì)CEA和AFP含量的同時(shí)測(cè)定。一個(gè)GNPs通過金-硫鍵作用連接上百個(gè)電化學(xué)發(fā)光底物，能實(shí)現(xiàn)所構(gòu)建體系

5、信號(hào)的放大，使制備的免疫傳感器具有良好的靈敏度。本方法對(duì)CEA和AFP的檢測(cè)線性范圍分別為0.05-50ngml-1和0.1-100ngml-1，檢測(cè)限分別為0.1ngml-1和0.1ngml-1(S/N=3)。
　　3.本文建立了一種可同時(shí)檢測(cè)雙組份腫瘤標(biāo)志物的免標(biāo)記電化學(xué)免疫測(cè)定方法，檢測(cè)了人血清樣品中癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)的含量。在實(shí)驗(yàn)中，我們首先將二種電化學(xué)底物，二茂鐵甲酸(FCA)和亞甲基藍(lán)(MB)，分別

6、結(jié)合在離子液體(IL)修飾的介孔硅(MPS)的孔道內(nèi)，制備FCA-IL-MPS和MB-IL-MPS復(fù)合材料;然后將CEA單克隆抗體(anti-CEA)和AFP單克隆抗體(anti-AFP)分別負(fù)載到兩種材料的孔內(nèi)，制得CEA和AFP的免標(biāo)記免疫探針(anti-CEA/FCA-IL-MPS，anti-AFP/MB-IL-MPS);最后將免疫探針涂覆在摻銦氧化錫(ITO)電極表面的不同部分，組裝得到雙組分的免標(biāo)記免疫傳感器。當(dāng)該免疫傳感器在

7、含有抗原的樣液中溫育后，CEA和AFP抗原通過特異性免疫反應(yīng)而結(jié)合到MPS孔道內(nèi)。由于形成的免疫復(fù)合物不導(dǎo)電且有一定的空間位阻，所以對(duì)電極表面的電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了阻礙。根據(jù)ITO不同位置上響應(yīng)電流的變化實(shí)現(xiàn)對(duì)CEA和AFP含量的同時(shí)測(cè)定。本方法對(duì)CEA和AFP的檢測(cè)線性范圍分別為0.5-80ngml-1和0.5-100ngml-1，檢測(cè)限分別為0.1ngml-1和0.1ngml-1(S/N=3)。離子液體具有高導(dǎo)電率，能實(shí)現(xiàn)所構(gòu)建體系信號(hào)的