新型硫化氫供體和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的研究.pdf

1、硫化氫(H2S)是生物體內(nèi)重要的氣體信號分子，參與多種病理生理過程。維持生物體內(nèi)硫化氫濃度平衡至關(guān)重要，硫化氫供體是提供外源性硫化氫的重要工具。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)是生物體內(nèi)重要的水解酶，催化谷氨?；鶑墓入赘孰幕蛘吆泄劝滨；衔镛D(zhuǎn)移到受體分子，其異常表達(dá)與腫瘤、糖尿病等疾病狀態(tài)有關(guān)。對GGT進(jìn)行選擇性、高靈敏、實時、可視化檢測，對于疾病診斷和病理生理研究具有重要意義。
　　本論文主要開展了以下工作:
　　1.以鄰硝

2、基芐硫醇，4-羥甲基-7-甲氧基香豆素和乙酰丙酸為原料設(shè)計合成了一種新型光活化硫化氫供體，并通過1H NMR，13C NMR和MS對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。該硫化氫供體自身熒光微弱，在經(jīng)過365nm強(qiáng)光照射后，快速釋放出硫化氫，同時釋放熒光物質(zhì)（7-甲氧基香豆素）乙酰丙酸甲酯。采用亞甲基藍(lán)法對光照釋放的硫化氫進(jìn)行檢測，并用色譜法對光裂解所釋放的（7-甲氧基香豆素）乙酰丙酸甲酯進(jìn)行了分析檢測。在365nm光照3-9min時間檢范圍內(nèi)，該硫化氫供

3、體的熒光強(qiáng)度與釋放的硫化氫量呈動態(tài)學(xué)相關(guān)性。通過監(jiān)測熒光強(qiáng)度的變化，可間接監(jiān)測硫化氫的釋放過程。
　　2.以4-氯-7-硝基苯并呋咱和谷胱甘肽為原料設(shè)計合成了一種新的GGT熒光探針，并用MS對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。此探針在475 nm激發(fā)光激發(fā)下，發(fā)出微弱熒光;經(jīng)GGT作用后，相同的激發(fā)波長下，探針溶液發(fā)出明亮的綠色熒光，最大發(fā)射波長為538nm。通過紫外光譜實驗，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)工作，推測探針對酶的響應(yīng)機(jī)理為酶切谷氨酰胺鍵之后自發(fā)進(jìn)行S