基于核酸研究平臺的高靈敏電化學生物傳感器構筑及性能研究.pdf

1、基于核酸研究平臺的高靈敏電化學生物傳感器構筑及性能研究學位論文完成日期：指導教師簽字：答辯委員會成員簽字：基于核酸研究平臺的高靈敏電化學生物傳感器構筑及性能研究個數量級。特異性強，具有相對較強的穩(wěn)定性。該方法在l：10稀釋的胎牛血清和緩沖溶液中ATP的檢測結果一致，表明所構筑的核酸適體生物傳感器有望用于實際樣品體系的檢測。4、凝血酶的含量及活性已被普遍認為與許多疾病如血栓、阿爾茨海默病緊密相關，實現其簡單，快速，高靈敏檢測尤為重要。本工

2、作設計兩個有著獨特序列的莖環(huán)探針DNA：識別探針和信號探針。識別探針DNA含有凝血酶核酸適體片段，可以和凝血酶形成配合物，從而打開莖環(huán)，釋放出的TDNA片段可以和信號探針進行雜交識別，引發(fā)外切酶III識別切割。通過外切酶III識別切割，實現識別DNA片段的循環(huán)以及二次靶標DNA片段的級聯擴增。同時釋放出大量二茂鐵標記的單核苷酸，進行電化學信號放大。實驗對凝血酶核酸適體堿基數進行了優(yōu)化。該檢測方法針對凝血酶的檢測具有特異性強、靈敏度高等優(yōu)

3、點，針對凝血酶的最低檢測限可達5pmol／L。同時該方法具有均相操作、免固定等優(yōu)點。5、基于聚合酶、Nicking酶以及Lambda外切酶組合信號放大策略，構建了一種無標記、高靈敏電化學DNA3’磷酸化酶(PNK)檢測新方法。電極界面組裝莖環(huán)結構DNA，其中DNA3’端標記磷酸基團。此時鐵氰化鉀向電極界面的電子轉移受到抑制。PNK存在下，去除3’磷酸基團。通過DNA聚合酶，使3’端堿基序列延長，Nicking酶識別切割形成的雙鏈DNA。