DNA assembler技術(shù)在順,順-己二烯二酸和Siderophere生物合成中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分:
　　二元羧酸順，順-己二烯二酸因其作為平臺(tái)化合物來(lái)生產(chǎn)一些諸如尼龍6，6，聚氨酯（通過(guò)中間體己二酸）以及聚對(duì)苯二甲酸乙二酯（通過(guò)對(duì)苯二甲酸）等有價(jià)值的生物塑料的潛在價(jià)值而引起人們的極大興趣。這里我們用釀酒酵母來(lái)生產(chǎn)順，順-己二烯二酸。通過(guò)將來(lái)自Klebsiella pnemoniae的3-脫氫莽草酸脫水酶，來(lái)自K.pnemoniae.的原兒茶酸脫羧酶以及來(lái)自Acinetobacter baylyi的鄰苯二酚1，2-雙加

2、氧酶基因?qū)氲浇湍钢衼?lái)構(gòu)建合成路徑。因PCA脫羧酶是合成中的限速步驟，本實(shí)驗(yàn)嘗試將連接有篩選標(biāo)記(G418)的PCA脫羧酶基因(AroY)通過(guò)酵母轉(zhuǎn)化將其整合到染色體的δ序列上，通過(guò)多輪轉(zhuǎn)化提高G418的篩選濃度來(lái)提高PCA脫羧酶在染色體上的拷貝數(shù)，最終得到一整合基因拷貝數(shù)約為9的菌株，順，順-己二烯二酸的產(chǎn)率提高約為76％，產(chǎn)量可達(dá)272mg/L。
　　第二部分:
　　“高鐵霉素”是一類結(jié)構(gòu)中含有“鐵螯合物”的作用機(jī)制獨(dú)特

3、的抗生素。其中的“鐵螯合物”可靶向細(xì)菌中特定的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，輔助抗生素分子以主動(dòng)運(yùn)輸?shù)姆绞礁咝мD(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入菌體，使抗生素作用效能顯著提高。Albomycin由鏈霉菌產(chǎn)生，是“高鐵霉素”家族中的典型代表，帶有鐵色素類的“鐵螯合物”。本研究在基本獲得Albomycin的生物合成基因簇的基礎(chǔ)上，利用DNAassembler技術(shù)構(gòu)建鐵色素的生物合成路徑，在S.lividans TK64中進(jìn)行異源表達(dá)來(lái)合成鐵色素。
　　第三部分:
　　具光

4、學(xué)活性的氨基酸已被廣泛用于合成抗生素，抗真菌藥，殺蟲劑和甜味劑。其中D-對(duì)羥基苯甘氨酸尤其重要，可用于合成羥氨芐青霉素、頭孢拉定等抗菌藥物，成為國(guó)內(nèi)最緊缺的醫(yī)藥中間體之一。它可從DL-苯海因通過(guò)D-海因酶和N-氨甲?；饷傅膬刹酱呋伞榱耸蛊涓哂泄I(yè)應(yīng)用價(jià)值，我們首次將這兩個(gè)酶與兒丁質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合異源表達(dá)于大腸桿菌中，并從中分離得到具催化活性的可溶蛋白，實(shí)現(xiàn)“一步酶”法合成D-對(duì)羥基苯甘氨酸。此外，嘗試將其固定于幾丁質(zhì)上，使酶