基于雜交鏈?zhǔn)椒从撑c氧化石墨高靈敏度檢測(cè)Microrna的熒光傳感器分析.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs)是一系列內(nèi)源的非編碼小分子RNA(19-24堿基)。MiRNA對(duì)體內(nèi)基因的表達(dá)起著關(guān)鍵性的作用,并且許多癌癥和多種疾病的發(fā)生與特定 miRNA的異常表達(dá)有著密切的聯(lián)系。因此,特定miRNA的高靈敏度檢測(cè)在未來(lái)的臨床診斷中有著非常重要的作用。由于許多重要miRNA在生物樣品中的濃度非常低,往往需要高靈敏度的核酸擴(kuò)增技術(shù)以達(dá)到miRNA的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。但是這些核酸擴(kuò)增手段往往需要有酶的參與,在每一種放大反應(yīng)中都

2、需要一種或多種酶的參與,否則放大反應(yīng)不能進(jìn)行。酶的活性受環(huán)境的影響很大,因此這些基于酶的放大反應(yīng)都需要很潔凈的樣品環(huán)境檢測(cè)miRNA。這就極大地限制了這些放大反應(yīng)在復(fù)雜的生物樣品中的應(yīng)用。
　　針對(duì) miRNA檢測(cè)我們提出了一種新的無(wú)酶信號(hào)放大策略,應(yīng)用了雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR)信號(hào)放大和氧化石墨烯(GO)表面固定的檢測(cè)手段。在該體系中,兩種穩(wěn)定的莖環(huán)結(jié)構(gòu)的DNA探針在沒(méi)有靶標(biāo) miRNA的溶液中能夠穩(wěn)定的共存,但是當(dāng)加入靶標(biāo) mi

3、RNA作為引發(fā)劑之后,靶標(biāo) miRNA即會(huì)引發(fā)一連串的雜交反應(yīng),產(chǎn)物是帶有缺口的長(zhǎng)鏈雙螺旋DNA結(jié)構(gòu)。HCR完成后,兩種莖環(huán)結(jié)構(gòu)的熒光探針和累積了熒光染料的HCR的產(chǎn)物共同存在于同一均相溶液中,這樣我們就需要應(yīng)用一種方法將HCR的反應(yīng)物和產(chǎn)物區(qū)分開來(lái),從而達(dá)到對(duì)miRNA檢測(cè)的目的。
　　研究發(fā)現(xiàn)GO可以通過(guò)π-π堆積作用強(qiáng)烈的吸附核酸探針?lè)肿?。熒光?biāo)記的莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA探針能夠通過(guò)π-π堆積作用吸附到GO的表面,導(dǎo)致其熒光信號(hào)完全