基于雜交鏈式反映與氧化石墨高靈敏度檢測Microrna的熒光傳感器分析.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs)是一系列內(nèi)源的非編碼小分子RNA(19-24堿基)。MiRNA對體內(nèi)基因的表達起著關(guān)鍵性的作用,并且許多癌癥和多種疾病的發(fā)生與特定 miRNA的異常表達有著密切的聯(lián)系。因此,特定miRNA的高靈敏度檢測在未來的臨床診斷中有著非常重要的作用。由于許多重要miRNA在生物樣品中的濃度非常低,往往需要高靈敏度的核酸擴增技術(shù)以達到miRNA的檢測標準。但是這些核酸擴增手段往往需要有酶的參與,在每一種放大反應中都

2、需要一種或多種酶的參與,否則放大反應不能進行。酶的活性受環(huán)境的影響很大,因此這些基于酶的放大反應都需要很潔凈的樣品環(huán)境檢測miRNA。這就極大地限制了這些放大反應在復雜的生物樣品中的應用。
　　針對 miRNA檢測我們提出了一種新的無酶信號放大策略,應用了雜交鏈式反應(HCR)信號放大和氧化石墨烯(GO)表面固定的檢測手段。在該體系中,兩種穩(wěn)定的莖環(huán)結(jié)構(gòu)的DNA探針在沒有靶標 miRNA的溶液中能夠穩(wěn)定的共存,但是當加入靶標 mi

3、RNA作為引發(fā)劑之后,靶標 miRNA即會引發(fā)一連串的雜交反應,產(chǎn)物是帶有缺口的長鏈雙螺旋DNA結(jié)構(gòu)。HCR完成后,兩種莖環(huán)結(jié)構(gòu)的熒光探針和累積了熒光染料的HCR的產(chǎn)物共同存在于同一均相溶液中,這樣我們就需要應用一種方法將HCR的反應物和產(chǎn)物區(qū)分開來,從而達到對miRNA檢測的目的。
　　研究發(fā)現(xiàn)GO可以通過π-π堆積作用強烈的吸附核酸探針分子。熒光標記的莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA探針能夠通過π-π堆積作用吸附到GO的表面,導致其熒光信號完全