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文檔簡介
1、MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性的非編碼小分子RNA,通過與目標信使 RNA(mRNA)結(jié)合形成基因沉默復合物(RISC)調(diào)控基因的表達。MiRNA在細胞代謝、分化、免疫反應和腫瘤發(fā)生等生物過程中有重要的調(diào)控作用。許多研究表明,癌癥組織中miRNA的表達異常通常與多種miRNA(一般是2-15個)有關。因此,建立一種靈敏度高、精密度好、可以同時檢測多種miRNA的方法不僅在癌癥的早期臨床診斷和治療方面有重要作用,對于深入了解腫
2、瘤發(fā)生的機理也有重要的意義。
本文建立了一種基于多重連接探針擴增技術(MLPA)高靈敏度檢測多重miRNA的方法,使用RNA堿基修飾的DNA探針,以miRNA為模板,能夠被T4 RNA ligase2高效連接。利用PCR對連接的探針擴增,毛細管電泳對PCR產(chǎn)物進行分離檢測,可檢測低至0.2 fmol/L的let-7a,并且能區(qū)分miRNA序列中單個堿基的錯配。我們隨機選取了5種序列不相關的miRNA:mir-92a、mir-3
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