高靈敏度熒光免疫分析方法研究.pdf

1、發(fā)展高靈敏度的免疫分析技術(shù)一直以來是免疫分析領(lǐng)域研究的一個(gè)重要方面，它對(duì)于實(shí)現(xiàn)一些重要疾病標(biāo)志物的檢測有著至關(guān)重要的意義。熒光儀具有簡便、靈敏、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。因此，開發(fā)新的熒光信號(hào)增強(qiáng)免疫分析技術(shù)無疑可以推動(dòng)免疫分析的發(fā)展。為此，本文主要在高靈敏度的熒光免疫分析方法方面做了一些工作： 1)提出了一種新的基于磁性納米顆粒的熒光免疫檢測方法。利用磁性納米顆粒上的氨基固定C3抗原。研制了一種基于磁納米顆粒作為生物載體，用于C3檢測熒

2、光免疫分析方法，將辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體(HRP—Ab)和磁性納米顆粒上固定的C3(MNPs—C3)與待測C3發(fā)生競爭性免疫反應(yīng)，HRP—Ab可以催化熒光底物3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺(TMB)發(fā)生淬滅，所以待測C3濃度可由底物溶液熒光猝滅的大小來判斷。 2)提出了一種基于磁性納米顆粒的人胸苷激酶1(hTK1)熒光免疫分析方法。hTK1通過共價(jià)吸附到核殼結(jié)構(gòu)的磁性顆粒表面，與樣品中的hTK1共同競爭辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體

3、(HRP—Ab)然后以對(duì)羥基苯丙酸(HPPA)為底物，通過測定酶催化下熒光強(qiáng)度的增加來間接測定樣品中抗原的濃度。應(yīng)用于人血清中hTK的測定，在0.01—1 ng/mL之間呈線性關(guān)系，檢測限為0.008 ng/mL。 3)提出了一種基于循環(huán)富集辣根過氧化物酶的用于檢測人IgG的新型熒光酶免疫分析方法。脫硫生物素與親合素的結(jié)合常數(shù)比較小，當(dāng)其與親合素結(jié)合后，在生理?xiàng)l件下即可被生物素取代，利用此取代反應(yīng)可對(duì)辣根過氧化物酶進(jìn)行循環(huán)富集。