PEG修飾固定化金屬離子介質(zhì)的制備及應(yīng)用研究.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽(ACEI)是一類可抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活性的功能多肽，從酶解體系中分離純化降血壓肽是一項(xiàng)十分耗時(shí)的繁瑣過程。近年出現(xiàn)的固定化金屬離子親和層析(MAC)技術(shù)是利用金屬離子與蛋白的螯合作用分離目標(biāo)蛋白，雖然具有分離操作簡便、處理量大、快速等優(yōu)勢，但在實(shí)際應(yīng)用中，由于金屬離子與非目標(biāo)大分子的非特異性吸附，導(dǎo)致特異性結(jié)合位點(diǎn)的下降，分離效率降低。為提高固定化金屬離子親和介質(zhì)的分離效率，本文采用共沉淀法制備磁流體

2、，通過乳液交聯(lián)法制備殼聚糖磁性微球作為親和載體，采用醛基化聚乙二醇單甲醚(mPEG-CHO)進(jìn)行修飾，螯合銅離子(Cu2+)制備mPEG修飾固定化金屬銅離子親和介質(zhì)(mPEG@IMAM@Cu2+)，以牛血清白蛋白(BSA)作為模型大分子，α-乳清蛋白水解體系獲得的降血壓肽纈氨酰-絲氨酰-亮氨酰-脯氨酰-谷氨酰-色氨酸(VSLPEW)作為模型活性多肽。研究mPEG@IMAM@Cu2+在混合體系中對(duì)ACEI活性肽的分離效果，具體內(nèi)容如下:<

3、br>　　以共沉淀法制備的Fe3O4為磁核，分別以戊二醛、環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑，采用乳液交聯(lián)法制備了戊二醛交聯(lián)、甲醛預(yù)交聯(lián)環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)兩種殼聚糖磁性微球(MCS、FEMCS)，并對(duì)MCS、FEMCS的相關(guān)性能進(jìn)行表征。
　　對(duì)兩種微球進(jìn)行活化，引入環(huán)氧基。以活化微球?yàn)榛w，制備相應(yīng)的固定化金屬銅離子親和介質(zhì)(IMAM@Cu2+)。
　　以mPEG-CHO為原料，對(duì)固定化金屬Cu2+親和介質(zhì)(IMAM@Cu2+)進(jìn)行mPEG修

4、飾改性，制備mPEG@IMAM@Cu2+。以BSA的吸附量與吸附阻拒率為指標(biāo)，優(yōu)化了制備了mPEG@IMAM@Cu2+，最佳工藝為:MCS為基體，配基密度為69μmol·g-1左右，反應(yīng)時(shí)間為20h，反應(yīng)溫度為40℃，n-CHO∶n-NH2為4∶1，所得mPEG@IMAM@Cu2+相比相應(yīng)的IMAM@Cu2+，對(duì)BSA吸附量為22.8mg· g-1，對(duì)BSA的吸附阻拒率為37.4％左右。
　　最后，研究mPEG@IMAM@Cu2+