酪氨酸酶生物傳感器的研制及其應(yīng)用于有機磷類農(nóng)藥的檢測.pdf

1、有機磷農(nóng)藥是目前使用非常廣泛的一類農(nóng)藥，它可以與體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶(AChE)結(jié)合形成磷?；阴Ｄ憠A酯酶，使酶失去活性，從而使得神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿大量積蓄，造成神經(jīng)功能嚴重損傷，甚至死亡。傳統(tǒng)的有機磷農(nóng)藥檢測方法主要有氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)與色質(zhì)聯(lián)用法等，盡管這些方法靈敏、準確，但是需要對樣品進行繁瑣的預(yù)處理，費時、成本高，而且儀器需要專業(yè)技術(shù)人員的操作和維護，不適用于現(xiàn)場檢測。因此，建立可靠、靈敏、快速和實用的有

2、機磷農(nóng)藥監(jiān)檢測的分析器件和方法，對于環(huán)境保護和食品安全等具有重要的現(xiàn)實意義。
　　 生物傳感器是將分子識別物質(zhì)如酶、DNA、抗體、細胞等作為分子識別物質(zhì)固定在傳導(dǎo)器上，將化學(xué)變化、熱變化等轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕姆治銎骷?。由于它響?yīng)快、靈敏度高、樣品需要量少、操作簡便、價格低廉、可微型化、可以實現(xiàn)連續(xù)現(xiàn)場檢測等特點，已成為分析檢測的重要器件。近年來，基于乙酰膽堿酯酶、有機磷水解酶和酪氨酸酶的有機磷電化學(xué)生物傳感的研究越來越受到人們的重視。

3、
　　 本論文共包括三章。第一章綜述了農(nóng)藥及其殘留問題、有機磷農(nóng)藥檢測方法和導(dǎo)電聚合物、非導(dǎo)電聚合物。
　　 第二章研究了28種有機磷農(nóng)藥與酪氨酸酶之間的抑制關(guān)系。它們對酪氨酸酶抑制的差異比較大，有些甚至沒有明顯抑制作用。對酪氨酸酶抑制作用比較強的有機磷農(nóng)藥分別為二嗪磷、滅菌磷、碘硫磷、甲基氯吡硫磷，它們IC50值分別為0.0614、0.0278、0.072、0.08mmol/L。二嗪磷、甲基氯吡硫磷、甲基吡惡磷、滅菌磷

4、、碘硫磷均屬于混合型抑制劑，它既能與底物競爭酶的活性中心，又通過生成酶-底物-抑制劑的三元絡(luò)合物來阻礙正反應(yīng)的進行。特丁硫磷為競爭型抑制劑，即抑制劑和底物競爭酶的活性中心。同時，滅菌磷和甲基氯吡硫磷對酪氨酸酶的抑制作用均屬于可逆的過程，也就是說增加效應(yīng)物的濃度將導(dǎo)致酶活力下降是由于酶活力受到抑制，催化效率降低，而不是通過減少有效酶量，而引起活力下降。
　　 第三章制備了鄰苯二胺、間苯二胺、1，8-萘二胺的非導(dǎo)電聚合物膜將酪氨酸酶

5、(Tyr)和底物(H2NQS)一起固定在玻碳電極上得到了GC-NQS-Tyr-oPPD、GC-NQS-Tyr-1，3-DAB、GC-NQS-Tyr-1，8-DAN三種生物傳感器。它們大多數(shù)都能很好的應(yīng)用于有機磷農(nóng)藥的檢測，且檢測限都在10-7～10-6范圍內(nèi)。但抑制效果各不相同，從第三章的分析知道間苯二胺非導(dǎo)電聚合物膜的酶傳感器檢測4種有機磷農(nóng)藥的整體效果最好。
　　 由于大部分的有機磷農(nóng)藥與酪氨酸酶之間屬于可逆性的抑制作用，故