肉食品中氟苯尼考殘留快速檢測膠體金試紙條的研制.pdf

1、氟苯尼考是一種人工合成的高效廣譜動物專用抗生素，常用于防治動物的各種細菌性疾病。但由于不規(guī)范使用和濫用，它在動物食品中會產(chǎn)生殘留，并因此帶來各種問題。為了保障食品安全問題，各國政府及監(jiān)測機構(gòu)均對氟苯尼考的使用和最高殘留限量(MRL)都做了規(guī)定，因此，本研究旨在應(yīng)用膠體金免疫層析原理，研制出氟苯尼考殘留檢測試紙條。
　　1.氟苯尼考多克隆抗體的制備及其鑒定。本研究根據(jù)氟苯尼考的結(jié)構(gòu)特性，采用戊二醛法設(shè)計出氟苯尼考的人工抗原（免疫原F

2、FA-BSA和包被原FFA-OVA），并用免疫原免疫BALB/C雌性小鼠，獲得可用于檢測氟苯尼考的特異性多克隆抗體。結(jié)果顯示:經(jīng)過紫外掃描鑒定，成功合成了人工抗原合FFA-BSA和FFA-OVA，偶聯(lián)比分別為12∶1和11∶1。制備的抗體效價達1∶32000以上，抑制率為50％(IC50)時的氟苯尼考濃度為36.9 ng/mL，與其他抗生素交叉反應(yīng)小。本試驗制備的氟苯尼考多克隆抗體具有較好親和力和高特異性，有良好的應(yīng)用價值。
　　

3、2.氟苯尼考殘留快速檢測膠體金試紙條的研制。采用檸檬酸三鈉還原法制備25nm膠體金，用制備的膠體金標記氟苯尼考的特異性抗體，用噴膜機把適量的金標抗體噴涂在結(jié)合墊上，適宜濃度的包被原和羊抗鼠二抗分別作為檢測帶和質(zhì)控帶包被在硝酸纖維素膜上，包被后的硝酸纖維素膜、樣品墊、膠體金結(jié)合墊、吸水墊及其他輔料組裝成氟苯尼考殘留快速檢測膠體金試紙條。結(jié)果顯示:研制的試紙條檢測靈敏度為1μg/mL，與氯霉素、甲砜霉素和喹乙醇等抗生素無交叉反應(yīng)，能在4℃干

4、燥的條件下可至少存放6個月。試驗證明制備的試紙條具有較高的靈敏度及特異性、操作便捷、穩(wěn)定可靠，可作為氟苯尼考殘留檢測的一種快速簡便方法。
　　3.膠體金免疫層析技術(shù)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法檢測肉食品中氟苯尼考的殘留。對肉食品中氟苯尼考殘留檢測的膠體金免疫層析法和液相色譜-質(zhì)譜法進行比較研究。膠體金免疫層析法對1.0μg/mL以上均能檢出，液相色譜-質(zhì)譜法平均回收率分別為86.5％、93.7％和90.9％，變異系數(shù)為2.1％

5、～5.0％，最低檢測限為100μg/kg。對80個樣品用膠體金免疫層析法篩選皆為陰性，經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜法驗證皆為陰性，未發(fā)現(xiàn)假陽性和假陰性。結(jié)果表明:膠體金免疫層析法具有快速，簡便，特異，靈敏度高的特點，適合基層檢驗機構(gòu)對動物產(chǎn)品中氯霉素殘留現(xiàn)場快速篩選;LC-MS法靈敏度高，適用于陽性樣品的精確定量。
　　總之，本研究所研制的氟苯尼考膠體金試紙條具有特異性強、穩(wěn)定性好、靈敏度高等特點，在實際動物組織樣品的氟苯尼考殘留檢測中所得到