以殼聚糖為載體新型免疫親和吸附劑及分子印跡聚合物的制備與應(yīng)用研究.pdf

1、殼聚糖是幾丁質(zhì)的脫乙?；a(chǎn)物，來源豐富，是自然界中僅次于纖維素的第二大天然多糖。具有無毒、易降解、與生物大分子表現(xiàn)出良好的相容性等優(yōu)點，因而在醫(yī)藥、食品、環(huán)境與農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。此外，由于其多糖鏈上含有大量的游離羥基、氨基等可改性接枝基團，殼聚糖在新型色譜填料的開發(fā)制備中也有著重要的應(yīng)用。
　　 在農(nóng)、獸藥殘留檢測過程中，由于殘留物水平較低、屬于痕量分析范疇，同時樣品基質(zhì)復(fù)雜，在殘留檢測之前通常需要進行樣品凈化處理。與傳

2、統(tǒng)的樣品凈化處理技術(shù)相比，免疫親和層析與分子印跡聚合物固相萃取有著選擇性高、操作快速簡便等優(yōu)點，表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。本研究以禁用蛋白同化類激素—去氫甲睪酮(metandienone，MA)為研究對象，分別制備獲得了以殼聚糖為載體的免疫親和柱及分子印跡親和柱，并對其性能及應(yīng)用進行了評價。主要結(jié)果如下:
　　 (1)以殼聚糖為載體制備戊二醛交聯(lián)殼聚糖，并與MA抗體偶聯(lián)制成免疫親和吸附劑，制備成免疫親和柱。用紅外光譜、電鏡對其進行結(jié)

3、構(gòu)表征，證明殼聚糖已交聯(lián)且抗體成功偶聯(lián)。單抗偶聯(lián)的最適pH為8.0、時間為5h、溫度為37℃、環(huán)氧氯丙烷終濃度為20％;該親和柱的最佳洗脫液為4mL的90％甲醇溶液，柱容量約為6500ngMA/g濕親和吸附劑;柱子的平均回收率為96.9％±1.12％;該柱重復(fù)使用次數(shù)為8次，回收率高于80％，柱容量保持在85％左右;親和柱的特異性良好;在空白豬肉樣品中加標(biāo)1.5ng/g、6.0ng/g，回收率分別為83.18％-90.05％、80.84

4、％-89.14％，CV分別為4.06％、4.88％;在空白飼料樣品中同樣加標(biāo)1.5ng/g、6.0ng/g，回收率分別為80.84％-90.05％、78.44％-91.09％，CV分別為4.47％、6.46％。
　　 (2)以MA為模板分子，以殼聚糖為功能單體制備了MA分子印跡聚合物，并將其填充到柱子中制成分子印跡親和柱。殼聚糖與MA的最佳比例為6∶1，最適偶聯(lián)pH為9.0，蔗糖的濃度為2％，環(huán)氧氯丙烷終濃度為1.0％，反應(yīng)溶液

5、中甲醇∶乙酸水溶液=1∶2;用紅外光譜、電鏡對其進行結(jié)構(gòu)表征，證明殼聚糖分子印跡聚合物已成功制備。MA印跡親和柱的最佳上樣溶液為10％甲醇溶液，洗滌溶液為蒸餾水，洗脫液為4mL純甲醇。由動力學(xué)試驗、Langmuir等溫吸附線、Scatchard分析得親和柱在2h后達到平衡，最大吸附量可達到11.5mg/g濕吸附劑，且MA與聚合物之間存在兩類不同的結(jié)合位點;柱子的平均回收率為95.94％±2.90％;該柱重復(fù)使用次數(shù)為18次;MA分子印跡