新型蛋白納米膠囊設(shè)計(jì)、制備及應(yīng)用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)藥物作為重要的生物技術(shù)藥物之一，被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥治療與組織工程等領(lǐng)域。蛋白質(zhì)藥物具有活性高、特異性強(qiáng)、毒性低、生物功能明確、臨床應(yīng)用范圍廣泛等眾多優(yōu)勢，可以在蛋白質(zhì)分子水平上實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的診斷、預(yù)防和治療，以及對(duì)細(xì)胞分化、修復(fù)和再生的誘導(dǎo)。本文著眼于蛋白質(zhì)藥物胞內(nèi)與細(xì)胞膜表面作用位置差異，提出針對(duì)蛋白質(zhì)胞內(nèi)給藥與蛋白質(zhì)細(xì)胞間傳遞機(jī)理的兩種納米膠囊制備平臺(tái)。
　　 本文采用靜電力固定水相原位聚合方法，制備尺寸均一的“殼核”結(jié)

2、構(gòu)模型蛋白質(zhì)納米膠囊；考察了聚合單體種類和比例對(duì)納米膠囊粒徑與攜帶電荷的影響；研究了攜帶正電荷與蛋白胞內(nèi)給藥效率的關(guān)系。結(jié)果表明：使用高正電荷單體Spermine－V可獲得粒徑較小、攜帶電荷量較高的納米膠囊。胞內(nèi)給藥結(jié)果顯示納米膠囊攜帶正電荷越高，其胞內(nèi)給藥效率越高；但納米膠囊正電量高于+8 mV后，樣品與細(xì)胞膜間相互作用太強(qiáng)，易引起細(xì)胞膜破裂，產(chǎn)生細(xì)胞毒性。對(duì)蓖麻毒素(ricin)納米膠囊外連接CD4或CD40等抗體的配體，建立可使用

3、于抗體配體與納米膠囊結(jié)合的普適方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)表面表達(dá)對(duì)應(yīng)的抗體受體的細(xì)胞的靶向性給藥要求，其靶向給藥效率比傳統(tǒng)方法提高4倍以上。
　　 制備了生長因子蛋白質(zhì)納米膠囊(血管內(nèi)壁生長因子VEGF，骨生長因子BMP=2)，實(shí)現(xiàn)了其對(duì)環(huán)境條件變化的自主可控響應(yīng)。使用可被特異性酶切斷的多肽作為納米膠囊交聯(lián)劑，獲得對(duì)酶分泌特異性響應(yīng)，從而釋放核內(nèi)蛋白的納米VEGF膠囊；使用酯類交聯(lián)劑制備納米膠囊，可實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境pH變化響應(yīng)進(jìn)而釋放出核內(nèi)BMP－

4、2蛋白。適宜電性與厚度的高分子外殼可以有效的提高核內(nèi)生長因子的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，保護(hù)生長因子在操作過程以及蛋白酶環(huán)境中的活性。納米膠囊外攜帶的雙鍵或氨基殘基可與生物相容載體表面的基團(tuán)(如透明質(zhì)酸水凝膠、膠原海綿等)發(fā)生化學(xué)鍵反應(yīng)，并以共價(jià)鍵形式固定于載體上，有效抑制在載體溶脹或體液沖刷過程中蛋白的流失，其蛋白流失量僅為傳統(tǒng)方法的1/4～1/10。納米膠囊有效的提高了生長因子在組織工程應(yīng)用中對(duì)細(xì)胞生長分化的誘導(dǎo)效率。
　　 采用兩步原位