氧化三甲胺代謝相關(guān)菌的研究.pdf

1、本文用含有TMAO的液體培養(yǎng)基經(jīng)過富集分別從鱈魚的體表和內(nèi)臟獲得能夠參與TMAO代謝的混合菌群,并通過對混合菌群144h的培養(yǎng),對使用非抑制性離子色譜法對其代謝TMAO能力進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示來自內(nèi)臟和表皮的混合菌群都能夠利用TMAO,產(chǎn)生大量的NH4+和TMA,但是在內(nèi)臟和體表混合菌群中TMAO被利用的情況卻并不同。在內(nèi)臟混合菌的發(fā)酵后期TMAO、NH4+和TMA都處于動態(tài)平衡,而在體表混合菌的發(fā)酵過程中TAMO含量一直下降并完全被利

2、用完畢,TMA含量先上升后下降,NH4+則一直處于上升狀態(tài)。這說明在內(nèi)臟和體表的混合菌中有著不同的菌種構(gòu)成,在體表的混合菌中存在著能夠利用TMAO還原產(chǎn)物TMA的細(xì)菌,而在內(nèi)臟混合菌種不存在能夠繼續(xù)代謝TMA的微生物。
　　 對來源于內(nèi)臟和表皮混合茵群進(jìn)行分離純化,共得到14株菌,通過對它們代謝TMAO的能力進(jìn)行檢測,分析了它們在參與TMAO代謝過程中可能的途徑。對分離的到的14株菌株中能夠代謝TMAO的5株細(xì)菌進(jìn)行了16SrD

3、NA的分析鑒定,對于經(jīng)過反復(fù)培養(yǎng)分別得到兩株能夠穩(wěn)定代謝TMAO的菌株,NZ-2和BP-1-1,再經(jīng)過Biolog微孔鑒定,最終確定這兩株菌分別是Stenotrophomonasmaltophilia(嗜麥芽糖寡氧單胞菌)和Providencia rettgeri(雷士普羅威登斯菌),在目前國內(nèi)外能夠代謝TMAO的細(xì)菌的文獻(xiàn)中尚未出現(xiàn),說明它們可能是新種。
　　 通過對能夠代謝TMAO的兩株細(xì)菌BP-1-1和NZ-2對TMAO的

4、利用情況進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)BP-1-1和NZ-2均不能利用TMAO作為唯一碳源和氮源,這與目前的報道相一致。TMAO可能是這兩株菌呼吸產(chǎn)能過程中的電子傳遞的最終受體,并將其還原為TMA,對TMAO的還原產(chǎn)物TMA不能繼續(xù)代謝產(chǎn)生甲醛或者其他含氮物質(zhì)。
　　 通過在有氧和厭氧條件下對BP-1-1和NZ-2進(jìn)行培養(yǎng),并對其發(fā)酵液中TMAO及其代謝產(chǎn)物的檢測,發(fā)現(xiàn)BP-1-1和NZ-2在生長過程中對TMAO的還原并不受氧氣的抑制,而有氧條

5、件下比在厭氧條件下對TMAO還原程度更大,這說明在這兩株細(xì)菌中所存在的TMAO還原酶與先前報道的大腸桿菌等細(xì)菌中的TMAO還原酶可能不同,在有氧存在時具有更高的活性,并且可能存在著與大腸桿菌以細(xì)胞色素為中間介質(zhì)的電子傳遞過程不同的電子轉(zhuǎn)移方式。
　　 本文通過分析24h內(nèi)BP-1-1和NZ-2在有氧和厭氧條件下對TMAO的利用情況和細(xì)菌的生長情況,確定TMAO還原所發(fā)生的階段是在BP-1-1和NZ-2的生長對數(shù)期,這與目前報道是

6、一致的。
　　 此外,通過在新鮮鱈魚肉中分別加入適當(dāng)濃度的BP-1-1和NZ-2菌懸液,置于冷藏溫度和室溫下恒溫恒濕培養(yǎng),并用加入對應(yīng)體積的無菌生理鹽水的新鮮鱈魚肉作空白對照,通過感官觀察發(fā)現(xiàn),在室溫條件下加入BP-1-1和NZ-2菌懸液的鱈魚肉細(xì)菌大量繁殖,并且迅速導(dǎo)致魚肉的腐敗。
　　 將魚肉中TMAO及其代謝產(chǎn)物的檢測結(jié)果與空白對照進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)魚肉在細(xì)菌侵染的情況下,其中的TMAO迅速被還原為TMA,而且魚肉中的