氧化三甲胺代謝相關(guān)菌的研究.pdf

1、本文用含有TMAO的液體培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)富集分別從鱈魚(yú)的體表和內(nèi)臟獲得能夠參與TMAO代謝的混合菌群,并通過(guò)對(duì)混合菌群144h的培養(yǎng),對(duì)使用非抑制性離子色譜法對(duì)其代謝TMAO能力進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示來(lái)自內(nèi)臟和表皮的混合菌群都能夠利用TMAO,產(chǎn)生大量的NH4+和TMA,但是在內(nèi)臟和體表混合菌群中TMAO被利用的情況卻并不同。在內(nèi)臟混合菌的發(fā)酵后期TMAO、NH4+和TMA都處于動(dòng)態(tài)平衡,而在體表混合菌的發(fā)酵過(guò)程中TAMO含量一直下降并完全被利

2、用完畢,TMA含量先上升后下降,NH4+則一直處于上升狀態(tài)。這說(shuō)明在內(nèi)臟和體表的混合菌中有著不同的菌種構(gòu)成,在體表的混合菌中存在著能夠利用TMAO還原產(chǎn)物TMA的細(xì)菌,而在內(nèi)臟混合菌種不存在能夠繼續(xù)代謝TMA的微生物。
　　 對(duì)來(lái)源于內(nèi)臟和表皮混合茵群進(jìn)行分離純化,共得到14株菌,通過(guò)對(duì)它們代謝TMAO的能力進(jìn)行檢測(cè),分析了它們?cè)趨⑴cTMAO代謝過(guò)程中可能的途徑。對(duì)分離的到的14株菌株中能夠代謝TMAO的5株細(xì)菌進(jìn)行了16SrD

3、NA的分析鑒定,對(duì)于經(jīng)過(guò)反復(fù)培養(yǎng)分別得到兩株能夠穩(wěn)定代謝TMAO的菌株,NZ-2和BP-1-1,再經(jīng)過(guò)Biolog微孔鑒定,最終確定這兩株菌分別是Stenotrophomonasmaltophilia(嗜麥芽糖寡氧單胞菌)和Providencia rettgeri(雷士普羅威登斯菌),在目前國(guó)內(nèi)外能夠代謝TMAO的細(xì)菌的文獻(xiàn)中尚未出現(xiàn),說(shuō)明它們可能是新種。
　　 通過(guò)對(duì)能夠代謝TMAO的兩株細(xì)菌BP-1-1和NZ-2對(duì)TMAO的

4、利用情況進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)BP-1-1和NZ-2均不能利用TMAO作為唯一碳源和氮源,這與目前的報(bào)道相一致。TMAO可能是這兩株菌呼吸產(chǎn)能過(guò)程中的電子傳遞的最終受體,并將其還原為T(mén)MA,對(duì)TMAO的還原產(chǎn)物TMA不能繼續(xù)代謝產(chǎn)生甲醛或者其他含氮物質(zhì)。
　　 通過(guò)在有氧和厭氧條件下對(duì)BP-1-1和NZ-2進(jìn)行培養(yǎng),并對(duì)其發(fā)酵液中TMAO及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)BP-1-1和NZ-2在生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)TMAO的還原并不受氧氣的抑制,而有氧條

5、件下比在厭氧條件下對(duì)TMAO還原程度更大,這說(shuō)明在這兩株細(xì)菌中所存在的TMAO還原酶與先前報(bào)道的大腸桿菌等細(xì)菌中的TMAO還原酶可能不同,在有氧存在時(shí)具有更高的活性,并且可能存在著與大腸桿菌以細(xì)胞色素為中間介質(zhì)的電子傳遞過(guò)程不同的電子轉(zhuǎn)移方式。
　　 本文通過(guò)分析24h內(nèi)BP-1-1和NZ-2在有氧和厭氧條件下對(duì)TMAO的利用情況和細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,確定TMAO還原所發(fā)生的階段是在BP-1-1和NZ-2的生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期,這與目前報(bào)道是

6、一致的。
　　 此外,通過(guò)在新鮮鱈魚(yú)肉中分別加入適當(dāng)濃度的BP-1-1和NZ-2菌懸液,置于冷藏溫度和室溫下恒溫恒濕培養(yǎng),并用加入對(duì)應(yīng)體積的無(wú)菌生理鹽水的新鮮鱈魚(yú)肉作空白對(duì)照,通過(guò)感官觀察發(fā)現(xiàn),在室溫條件下加入BP-1-1和NZ-2菌懸液的鱈魚(yú)肉細(xì)菌大量繁殖,并且迅速導(dǎo)致魚(yú)肉的腐敗。
　　 將魚(yú)肉中TMAO及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)結(jié)果與空白對(duì)照進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)魚(yú)肉在細(xì)菌侵染的情況下,其中的TMAO迅速被還原為T(mén)MA,而且魚(yú)肉中的