多抗逆性嬰兒雙歧桿菌優(yōu)良菌株的選育及其微膠囊化研究.pdf

1、雙歧桿菌是人體腸道內(nèi)有益菌群之一,對(duì)人體健康發(fā)揮著重要作用,目前已被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中。近幾年來(lái)世界發(fā)達(dá)國(guó)家在這方面做了大量的研究,但我國(guó)對(duì)于雙歧桿菌制品的開(kāi)發(fā)還很落后,主要是因?yàn)殡p歧桿菌增殖培養(yǎng)過(guò)程對(duì)條件要求比較苛刻。目前對(duì)其開(kāi)發(fā)主要存在活菌數(shù)量低、保藏期短等技術(shù)質(zhì)量問(wèn)題。
　　 本文以嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)為原料,對(duì)其進(jìn)行復(fù)合誘變,利用三層包埋法將突變株進(jìn)行微膠囊化,并優(yōu)化了其生長(zhǎng)

2、培養(yǎng)基。目的在于選育出高產(chǎn),多抗性的嬰兒雙歧桿菌,本試驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　 (1)以嬰兒雙歧桿菌為初發(fā)菌株,對(duì)其進(jìn)行耐酸、耐膽鹽、耐抗生素等抗性試驗(yàn),初發(fā)菌株的極限耐受pH值為5.0,可耐受膽鹽濃度2％,在抗生素環(huán)境下菌株不生長(zhǎng)繁殖。采用紫外線硫酸二乙酯復(fù)合誘變法對(duì)初發(fā)菌株進(jìn)行誘變選育,篩選到了突變株Bi-A54,該突變株的極限耐受pH值為3.8,在膽鹽濃度2.4％,抗生素氨芐青霉素濃度不大于0.6mg/mL的培養(yǎng)基中可穩(wěn)定

3、生長(zhǎng)。突變株的菌落、菌體形態(tài)與初發(fā)菌株完全一致,經(jīng)鑒定是嬰兒雙歧桿菌的變異菌株。對(duì)突變株進(jìn)行生理生化試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)突變株可利用阿拉伯糖。
　　 (2)通過(guò)單因素試驗(yàn)確定了突變株的最佳生長(zhǎng)繁殖條件:最佳培養(yǎng)溫度為37℃,最佳接種量為3％,最適初始pH值為6.4。對(duì)突變株Bi-A54進(jìn)行培養(yǎng)基優(yōu)化試驗(yàn),經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)得到優(yōu)化培養(yǎng)基的最佳配比為:大豆蛋白胨1.1％、酵母膏0.5％、大豆低聚糖1.3％、葡萄糖0.6％、番茄汁8.0％,胡蘿卜汁

4、7.0％。優(yōu)化培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的突變株活菌數(shù)為2.68×109cfu/mL,比基礎(chǔ)培養(yǎng)基中活菌數(shù)7.62×108cfu/mL提高了一個(gè)數(shù)量級(jí),是其3.5倍。菌液的滴定酸度由115.69°T,增加到156.01°T。
　　 (3)通過(guò)正交試驗(yàn)得到凍干保護(hù)劑的最佳配比:海藻糖12％、甘油4％、明膠0.5％、維生素C0.5％。在添加了優(yōu)化保護(hù)劑的情況下,經(jīng)冷凍干燥后的突變株存活率為70.32％。經(jīng)過(guò)兩次凍干和三次微膠囊化試驗(yàn),測(cè)得微膠

5、囊中活菌總數(shù)達(dá)到2.53×1010cfu/g,最初的活菌數(shù)為3.64×1010 cfu/g,未經(jīng)過(guò)微膠囊化的凍干菌粉活菌數(shù)為1.27×1010 cfu/g。經(jīng)過(guò)微膠囊化的菌株存活率為69.51％,未經(jīng)微膠囊化的凍干菌粉中菌株存活率為34.90％。該試驗(yàn)大大提高了菌株在生產(chǎn)過(guò)程中的存活率,對(duì)生產(chǎn)有著實(shí)際意義。通過(guò)單因素試驗(yàn)確定了優(yōu)化菌泥與保護(hù)劑的最佳配比3:1,優(yōu)化保護(hù)劑的最佳pH值6.5,以及菌泥與優(yōu)化保護(hù)劑的最佳震蕩混合時(shí)間30min