兩歧雙歧桿菌微膠囊制備關(guān)鍵技術(shù)的研究.pdf

1、雙歧桿菌(Biftdobacterla)是人消化道內(nèi)重要的生理性細菌，具有防治腸道感染、調(diào)節(jié)人體免疫、抗腫瘤作用等多種生物學(xué)功能，對人體的健康有重要作用。雙歧桿菌已廣泛用于食品和微生態(tài)制藥方面。但是，由于雙歧桿菌是專性厭氧菌，對營養(yǎng)要求高，對低pH值的抵抗力差，這限制了雙歧桿菌制品的開發(fā)和應(yīng)用。 本研究以兩歧雙歧桿菌(Bifidobacteria bifidum)為研究對象，對兩歧雙歧桿菌進行耐氧耐酸馴化篩選，從而獲得有利于生產(chǎn)

2、應(yīng)用的菌株，并對該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵條件、凍干保護劑、凍干工藝和微囊化工藝進行研究優(yōu)化，最終制得耐酸腸溶型兩歧雙歧桿菌微膠囊。 1．通過多次將兩歧雙歧桿菌暴露于氧中來馴化獲得耐氧兩歧雙歧桿菌菌株，然后再通過逐步降低培養(yǎng)基pH值來篩選出耐酸的菌株，從而得到對氧和酸的耐受能力有一定提高的兩歧雙歧桿菌菌株。 2．采用SAS軟件的響應(yīng)面方法對兩歧雙歧桿菌的培養(yǎng)基進行了優(yōu)化。首先應(yīng)用Plackett-Burman設(shè)計法篩選影響

3、兩歧雙歧桿菌生長的重要營養(yǎng)因素，再應(yīng)用最陡爬坡實驗法逼近最大響應(yīng)區(qū)域，利用Box-Benhnken的中心組合設(shè)計及響應(yīng)面分析確定主要影響因子酵母膏、低聚果糖、半胱氨酸鹽酸鹽的最佳濃度。用響應(yīng)面分析法求得培養(yǎng)基的最佳組合為：酵母膏 1.63％，低聚果糖0.13％，半胱氨酸鹽酸鹽0.0076％，酪蛋白胨1．0％，大豆蛋白胨0．5％，葡萄糖0．5％，@Nso 0．1％，K2HP040．2％，MgCl<,2>·6H<,2>O0.05％，CaCl

4、<,2>0.015％，ZnSO<,4>·7H<,2>O0.025％，F(xiàn)eCl<,3>0.01％，pH6.5。 3．對兩歧雙歧桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)條件進行研究，確定的最佳的發(fā)酵工藝為： 培養(yǎng)基滅菌后通入氮氣保持罐壓0.1Mpa，種齡為12小時，接種量為8％，培養(yǎng)溫度為37℃，攪拌速度為50轉(zhuǎn)/分鐘，當(dāng)培養(yǎng)基pH降到6.0時，加堿將pH控制在6.5±0.2的范圍，培養(yǎng)18小時后放罐離心收集菌體。 4．通過單因素試驗和正交設(shè)

5、計法對兩歧雙歧桿菌菌體凍干的保護劑進行優(yōu)化，獲得在凍干過程中能有效保護兩歧雙歧桿菌存活的復(fù)合保護劑，再對菌懸液共晶點的測定和凍干工藝進行研究。獲得最佳凍干工藝為：用8％海藻糖+2％甘油+0.08％半胱氨酸鹽酸鹽+6％脫脂奶的復(fù)合物作為兩歧雙歧桿菌的凍干保護劑，兩歧雙歧桿菌和保護劑混合均勻后，分裝托盤，菌懸液厚度為1cm。將凍干機的凍干箱先預(yù)冷到-35℃，再將菌懸液裝入凍干箱內(nèi)，當(dāng)樣品溫度達到-35℃，保持此溫度2小時，然后在溫度為-32

6、℃和真空度為10-30Pa的條件下進行升華干燥，樣品的干燥進入了解吸干燥階段時將解吸干燥溫度設(shè)為25℃，樣品溫度已達到設(shè)定的解吸干燥溫度后保持4小時，結(jié)束凍干。 5．選用耐酸腸溶性囊材羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)，對兩歧雙歧桿菌凍干菌粉的微囊化工藝進行研究。優(yōu)化的微囊化兩歧雙歧桿菌工藝是用蠕動泵以20ml/min的流速將 10％囊材液加入流化床內(nèi)，包囊溫度控制在37℃，流化床空氣流速為12 M<'3>/h。用此微囊