無標記阻抗型AFB1免疫傳感器的研究.pdf

1、本文概述了免疫傳感器和修飾電極的研究進展及其應用，分析了AFB1的檢測方法的優(yōu)缺點，主要是研究了“鏈狀”聚鄰苯二胺（PoPD）修飾電極和AFB1免疫傳感器的制備條件，并采用電化學阻抗譜（EIS）法對AFB1進行了定量檢測，取得了良好的檢測效果。
　　首先，采用循環(huán)伏安法制備PoPD修飾電極，研究表明在0.05mol/L o-PD+1mol/L H2SO4電聚合溶液中，-600mV~1000mV的電位范圍下，以50mV/s掃描速率，

2、循環(huán)30周可以得到含有大量氨基-NH2的“鏈狀”結構的PoPD膜。該膜不僅具有良好的滲透選擇性能，可以使H+選擇滲透進入膜內，而且對H+/H的氧化還原反應具有催化作用。
　　然后，基于PoPD修飾電極，研究了AFB1免疫傳感器的制備條件和AFB1抗原的固定條件。結果表明在25℃下，戊二醛的交聯、anti-AFB1純化抗體的固定和小牛血清的封閉，三者的操作時間應為45min；80％PBS+20%甲醇作為反應溶液，pH=7.40，結合

3、溫度為30℃可以獲得最大的AFB1抗原固定量。
　　其次，對AFB1免疫傳感器的組裝過程中發(fā)生的反應進行了研究。戊二醛與PoPD/Au電極進行交聯和抗體固定時，戊二醛的兩個醛基-CHO分別與PoPD的氨基-NH2以及抗體免疫球蛋白的殘余氨基-NH2發(fā)生了席夫堿反應，形成了穩(wěn)定的Ar-N=C(CH2)3C=N-R結構，從而將抗體固定在了電極表面，形成了具有分子識別功能的AFB1免疫傳感器。
　　再次，采用EIS法，對AFB1免

4、疫傳感器的組裝過程進行了電化學表征并構建了分子識別膜的界面模型。PoPD/Au電極表面隨著戊二醛交聯、anti-AFB1抗體固定及小牛血清封閉的進行，電子傳遞電阻逐層增大；在進行AFB1抗原的特異性免疫反應時，電子傳遞電阻隨著AFB1的免疫結合量的增加而增大；由于H+的非特異性吸附以及電極表面的不均勻的影響，AFB1免疫傳感器的EIS譜圖具有明顯的“彌散效應”。
　　最后，利用AFB1免疫傳感器，采用EIS法對AFB1進行了檢測。

5、結果顯示，在0.03μg/mL~0.7μg/mL范圍內具有兩段線性關系。當濃度范圍為0.03μg/mL~0.1μg/mL時，線性方程為ΔRP=-5960Ω+2.75×1011×cAFB1，R2=0.9946；當濃度范圍為0.1μg/mL~0.7μg/mL時，線性方程為ΔRP=19410Ω+2.49×1010×cAFB1，R2=0.9807；最低檢測限LOD為2.75×10-8g/mL。
　　另外，對AFB1免疫傳感器免疫傳感器的解