廣西PRRSV GXA株全基因序列測定、致病性實(shí)驗(yàn)及PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查研究.pdf

1、本研究運(yùn)用RT-PCR方法，完成了廣西首株豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)GXA株的全基因組序列的測定，結(jié)果顯示GXA株基因組全長為15422nt，包括10nt的polyA尾。通過分析證實(shí)GXA株全基因與VR-2332、RespPRRSMLV、BJ-4的同源性最高分別為98.4％、98.6％、98.6％，與高致病性PRRSV毒株同源性為88

2、％-89.9％，與歐洲型LV株的同源性為58.3％，因此在分子水平上證實(shí)了GXA株為經(jīng)典美洲型PRRSV毒株。其5’UTR、3’UTR與RespPRRSMLV株同源性為100％，非結(jié)構(gòu)蛋白NSP2不存在30個(gè)氨基酸的缺失；結(jié)構(gòu)蛋白的糖基化位點(diǎn)均與RespPRRSMLV株一致；推測的9個(gè)與毒力相關(guān)的氨基酸位點(diǎn)均與RespPRRSMLV株相同，因此GXA株可能來源于弱毒疫苗RespPRRSMLV株。遺傳進(jìn)化分析顯示，我國PRRSV毒株可以分

3、為4個(gè)亞型，GXA歸屬于1亞型，此型與疫苗株RespPRRSMLV高度同源。
　　 致病性實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，攻毒豬沒有出現(xiàn)有發(fā)熱、呼吸困難、精神沉郁、死亡等高致病性PRRSV感染時(shí)出現(xiàn)的臨床癥狀；病毒血癥維持的時(shí)間較短，但是能夠產(chǎn)生較高的抗體水平；剖殺后病理變化不明顯，內(nèi)臟器官病毒核酸檢出率低，因此推測GXA株為PRRSV弱毒株。
　　 本研究另外運(yùn)用RT-PCR方法從廣西部分市縣收集的病料中成功的克隆了19株P(guān)RRSV的N

4、SP2部分基因及18株P(guān)RRSV的ORF5基因。將19株P(guān)RRSVNSP2部分基因與廣西2006-2008年的PRRSVNSP2部分基因序列及國內(nèi)外代表毒株建立遺傳進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)廣西PRRSVNSP2基因又可以劃分為5個(gè)分支。本研究新發(fā)現(xiàn)一株GXBB-12010除536-565處29個(gè)氨基酸缺失外在470-505位另有35位氨基酸的缺失，NSP2“35+29”型氨基酸的不連續(xù)缺失，這種特征的毒株為廣西境內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)。
　　 將18株P(guān)

5、RRSV的ORF5基因與廣西2002-2008年的PRRSVORF5基因序列及國內(nèi)外代表毒株建立遺傳進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)廣西PRRSVORF5基因可以劃分為8個(gè)亞型，其中Ⅷ啞型主要來源于2006年以后且與JXA1、HuN4同源性較高，其余亞型主要來源2006年以前，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ與VR2332、MLV同源關(guān)系較高，Ⅳ、V、Ⅵ、Ⅶ與CH-1a、HB-2(sh)/2002同源性較高。各個(gè)亞型主要變化表現(xiàn)為：(1)毒力決定位點(diǎn)13和151位氨基酸的改變；(