用于大豆膳食纖維改性的里氏木霉工程菌的構建.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩71頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、膳食纖維對人體健康具有特殊的生理功能,因此膳食纖維類食品受到消費者的歡迎,而可溶性膳食纖維被證實具有更好的生理作用和功能特性。目前,大豆可溶性膳食纖維主要通過酶法降解豆渣制備。但是所用的酶制劑含有多種酶組分,每種酶對大豆膳食纖維的改性可能發(fā)揮著不同的作用。里氏術霉內切葡聚糖酶EGⅡ、內切木聚糖酶XYNⅠ和XYNⅡ有利于可溶性膳食纖維的生成,而木糖苷酶XYND、β-葡萄糖苷酶BGLⅠ、內切葡聚糖酶EGⅠ、外切葡聚糖酶CBHI等組分不利于可

2、溶性膳食纖維的生成。由此導致酶法制備大豆可溶性膳食纖維產(chǎn)量低、質量差、工藝不穩(wěn)定等問題。因此,利用基因工程技術培育工程菌,增加有利酶組分、降低不利酶組分,以提高可溶性膳食纖維的產(chǎn)量和質量,具有重要的研究價值。
   本課題利用農桿菌介導法轉化里氏木霉QM9414,敲除其木糖苷酶基因xynd和β-葡萄糖苷酶基因bglⅠ,試圖為大豆可溶性膳食纖維的生產(chǎn)提供酶制劑工程菌。
   主要研究結果如下:
   1.農桿菌介導

3、的里氏木霉遺傳轉化體系的建立和優(yōu)化本實驗優(yōu)化了農桿菌轉化條件,主要從共培養(yǎng)的時間、溫度、和菌體的濃度等方面進行了優(yōu)化。結果表明當乙酰丁香酮的濃度為200μmol/L,共培養(yǎng)時間為42h,溫度24℃,孢子濃度為107個/ml和農桿菌初始濃度OD660為0.25時,轉化效率較高。
   2.△ura3缺陷型菌株的篩選構建了ura3缺失基因的載體pEMT-△ura3,并將pEMT-△ura3質粒通過凍融法轉入農桿菌GV3101中,與里

4、氏木霉共培養(yǎng),篩選轉化子,獲得ura3缺陷型菌株1株,其同源重組率為16.6%。
   3.△ku70缺陷型菌株篩選構建了ku70基因敲除載體pEMT-pyrA,并將pEMT-pyrA質粒通過凍融法轉入農桿菌GV3101中,與ura3缺陷性菌株共培養(yǎng),篩選轉化子,獲得ku70缺陷型菌株1株,其同源重組率為25%。
   4.里氏木霉木糖苷酶xynd基因、bglⅠ基因的敲除通過重疊延伸PCR的方法將.xynd5,bgⅠ3,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論