絲氨酸工程菌的構(gòu)建及高效表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、L-絲氨酸是氨基酸輸液的重要成分,化妝品的添加劑,酶法生產(chǎn)色氨酸的前體物質(zhì).由于L-絲氨酸處于其他幾種氨基酸、核苷酸、和磷脂的合成代謝的中間位置,較其他氨基酸來說,它的體內(nèi)代謝運(yùn)轉(zhuǎn)速度極快.因此,直接發(fā)酵生產(chǎn)L-絲氨酸是很困難的.酶法合成L-絲氨酸由于利用甘氨酸和甲醛特異的合成L-絲氨酸,具有原料來源方便,原料成本低和可合成高濃度產(chǎn)品等優(yōu)點(diǎn),因此是最有前景的L-絲氨酸生產(chǎn)方法.絲氨酸的酶法合成系利用絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(serinehyd

2、romethyl-transferase,SHMT)催化甲醛和甘氨酸(Gly)可逆地合成L-Serine,反應(yīng)過程中SHMT需PLP和四氫葉酸(THFA)作為其輔因子.絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶在生物體內(nèi)由glyA基因編碼,且自然界中的一般的菌體內(nèi)都含有g(shù)lyA基因.該課題的工作是采用PCR技術(shù),以大腸桿菌K12菌株和假單孢菌T46的染色體DNA為模板,擴(kuò)增得到約1.3kb的glyA基因片段,將PCR產(chǎn)物插入到表達(dá)質(zhì)粒pETblue中,以重組質(zhì)

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