共聚焦掃描顯微鏡輔助離子交換置換色譜動力學的研究.pdf

1、與傳統(tǒng)洗脫色譜相比置換色譜具有分辨率高、處理量大等優(yōu)點，但其機理較復雜，這在一定程度上限制了其在生物分離領(lǐng)域的應用。已有學者從宏觀角度研究了置換色譜中動力學對等速置換列的影響，但對其微觀過程研究較少。目前在置換色譜的微觀研究上仍存在挑戰(zhàn)。
　　本研究主要利用共聚焦激光掃描共焦顯微鏡(CLSM)這一有效的微觀實驗手段研究了雙組份體系在QSepharoseHP上的置換分離過程。為達到這一目的，以綠色熒光蛋白(eGFP)和紅色熒光蛋白(

2、RFP)兩種內(nèi)源熒光蛋白為模型蛋白，糖精鈉為置換劑，研究了不同鹽濃度和置換劑濃度下置換劑對單組份及雙組份體系的置換分離。單組份的置換色譜實驗表明在140mmol/LNaCl和120mmol/LNaCl條件下，均能實現(xiàn)糖精鈉對兩種蛋白質(zhì)的置換，糖精鈉對雙組份的置換分離則只能在120mmol/LNaCl條件下進行，在140mmol/LNaCl條件下無法實現(xiàn)對雙組份的置換分離，此時流出液中兩種蛋白質(zhì)的區(qū)帶重疊較嚴重，表明置換劑的誘導鹽梯度效應

3、對等速置換列的形成有重要影響。
　　CLSM實驗從粒子尺度揭示出置換劑的加入會在介質(zhì)內(nèi)部產(chǎn)生誘導鹽梯度效應。140mmol/LNaCl條件的下CLSM實驗顯示在置換的初始階段，兩種蛋白質(zhì)熒光減弱速率相同，表明糖精鈉對這兩種蛋白質(zhì)的置換能力相同。在置換后期，RFP熒光減弱速率下降，當使用低濃度置換劑時，這種現(xiàn)象更加明顯。同單組份體系相比，雙組份的置換過程存在延滯期，主要表現(xiàn)在對eGFP置換過程的延遲，表明蛋白質(zhì)的共同吸附對等速置換列