激光掃描共聚焦顯微鏡在細(xì)胞周期研究中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分:激光掃描共聚焦顯微鏡用于蛋白質(zhì)的定位和定量同步分析;目的:通過對流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry)分選(sorting)后得到不同細(xì)胞周期時相的細(xì)胞進(jìn)行共聚焦形態(tài)學(xué)分析,更精確、直觀、有效地進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)的定位和定量分析,以期為研究蛋白質(zhì)的表達(dá)提供更為豐富的生物學(xué)信息.方法:采用雙參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)Cyclin A/DNA分析法將MOLT-4細(xì)胞分選出細(xì)胞周期各時相的細(xì)胞,然后利用激光共聚焦顯微鏡的斷層顯像功能進(jìn)行Cycl

2、in A的胞內(nèi)定位和定量分析.結(jié)果:發(fā)現(xiàn)用Confocal進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量分析與流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果有一致性,同時還能進(jìn)行胞漿和胞核蛋白質(zhì)表達(dá)的定位和定量同步分析.結(jié)論:激光共聚焦顯微鏡能有效地運(yùn)用于熒光標(biāo)記的蛋白質(zhì)表達(dá)的定位和定量同步分析.第二部分:咖啡因解除丁酸鈉對MOLT-4細(xì)胞早G<,1>期的阻滯效應(yīng);目的:觀察咖啡因能否消除丁酸鈉在早G<,1>期對MOLT-4細(xì)胞的阻滯效應(yīng).方法:體外培養(yǎng)的MOLT-4細(xì)胞與1mM的丁酸鈉和咖啡因

3、孵育,通過Sub-G<,1>法、Cyclin/DNA雙參數(shù)分析法和激光共聚焦顯微鏡定量技術(shù)分析藥物對MOLT-4細(xì)胞的細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率以及Cyclin E、Cyclin D<'3>表達(dá)的影響.結(jié)果:丁酸鈉能夠誘導(dǎo)MOLT-4細(xì)胞的G<,1>期阻滯(伴隨凋亡)伴有Cyclin E表達(dá)降低和Cyclin D<'3>過度表達(dá),而經(jīng)咖啡因干預(yù)后丁酸鈉的阻滯可以被解除.結(jié)論:咖啡因能夠解除丁酸鈉在早G<,1>期對MOLT-4細(xì)胞的阻滯,該