兩歧雙歧桿菌馴化及培養(yǎng)條件優(yōu)化的研究.pdf

1、本文以兩歧雙歧桿菌為出發(fā)菌株，通過培養(yǎng)的方式將兩歧雙歧桿菌進(jìn)行了耐氧、耐酸和耐膽鹽馴化，經(jīng)過馴化以后的兩歧雙歧桿菌，其耐氧、耐酸、耐膽鹽性能均得到一定程度的改善。馴化后的兩歧雙歧桿菌能夠在兼性厭氧的條件下穩(wěn)定生長，其菌體生長和產(chǎn)酸情況均較未經(jīng)馴化的原始菌優(yōu)良。 分別選取胡蘿卜汁、馬鈴薯汁和西紅柿汁類天然增殖因子，以及低聚木糖、低聚果糖、乳糖和半乳糖類作為增殖因子進(jìn)行研究。分析討論了各種增殖因子的最佳添加量以及在此添加量下的生長曲

2、線比較。研究表明：前三種增殖因子的最佳添加量均為3％，且增殖影響的大小依次為：胡蘿卜汁>馬鈴薯汁>西紅柿汁；而在功能糖類增殖因子中，低聚果糖和半乳糖的增殖作用不明顯，低聚木糖和乳糖的增殖作用相對(duì)較為明顯，其中低聚木糖的最佳添加量為0.8％，乳糖的最佳添加量為1.0％，在此添加量下分別作了生長曲線的比較。 采用正交實(shí)驗(yàn)法確定了兩歧雙歧桿菌的優(yōu)化培養(yǎng)基組成以及優(yōu)化培養(yǎng)條件。其中培養(yǎng)基優(yōu)化的結(jié)果為：大豆蛋白胨1.5％、胰蛋白胨0.8％

3、、酪蛋白胨0.8％、酵母膏0.5％、牛肉膏1％、葡萄糖1％、乳糖1％，無機(jī)鹽溶液(CaCL2:0.2g，MgSO4·7HzO：0.48g，KH2PO4:1.0g，NaHCO3:10.0g，K2HPO4:1.0g，NaCL：2.0g，水1L)仍然以原始比例添加。培養(yǎng)條件優(yōu)化的結(jié)果為：初始pH值8.0，接種量5％，優(yōu)化菌體生長種齡為24h，優(yōu)化產(chǎn)酸種齡為36h，培養(yǎng)溫度41℃ 在兼性厭氧前提下，實(shí)現(xiàn)兩歧雙歧桿菌在發(fā)酵罐上的生長正常，

4、其菌體量和產(chǎn)酸量均高于三角瓶培養(yǎng)，葡萄糖利用也較充分。在發(fā)酵罐上用最優(yōu)培養(yǎng)基進(jìn)行兩歧雙歧桿菌的流加發(fā)酵，其OD600值能達(dá)1.670以上，此時(shí)采用厭氧環(huán)境下平板活菌計(jì)數(shù)，總菌數(shù)為6.3×108(個(gè)/mL)，產(chǎn)乳酸量也能高達(dá)620(mg/100mL)。 采用苯酚-硫酸法測(cè)定了兩歧雙歧桿菌產(chǎn)胞外多糖的曲線；初步確定了雙歧桿菌產(chǎn)胞外糖的最佳條件為：初始pH值8.0、接種量5％、溫度37℃、種齡36h，這一條件下產(chǎn)糖量不低于270.0m