2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、盡管安全有效的疫苗應用至今已有近三十年,但乙型肝炎病毒的感染仍然是全球重大的公共衛(wèi)生問題之一?;贖BV基因組序列的差異目前將其分為A~J十個基因型,我國是HBV感染的高發(fā)區(qū),廣泛分布的主要是B和C兩種基因型。研究發(fā)現(xiàn)B、C基因型HBV感染者在病毒學、臨床表現(xiàn)及對干擾素的反應方面存在較大差異。但目前為止引起B(yǎng)、C基因型HBV表現(xiàn)差異的具體機制尚未完全闡明。
  HBV全長3.2kb,其調(diào)控元件包含C、S1、S2與X四個啟動子以及E

2、nhⅠ和EnhⅡ兩個增強子。鑒于HBV調(diào)控元件對其復制、轉(zhuǎn)錄及蛋白表達的重要調(diào)控作用,我們通過對B、C基因型HBV調(diào)控元件的活性進行比較分析,以期找出兩個基因型表現(xiàn)差異的原因及機制。
  本研究主要從以下幾部分展開論述:
  第一部分 通過對B、C基因型HBV序列進行同源分析,分別獲得這兩個基因型HBV基因組的保守序列。之后以本實驗室保存的病毒株作為模板進行調(diào)控序列的擴增,并將差異位點序列突變?yōu)楸J匦蛄校晒?gòu)建了B、C基因

3、型保守的HBV各調(diào)控元件的螢火蟲熒光素酶報告質(zhì)粒,為后續(xù)研究奠定了基礎。
  第二部分 通過比較B、C基因型保守的HBV各調(diào)控元件的活性發(fā)現(xiàn)Xp-EnhⅠ、Xp、及BCp活性B、C基因型間無統(tǒng)計學差異,Cp-EnhⅡ、Cp及SpⅠ活性B型高于C型,而SpⅡ活性B型低于C型。隨后通過對SpⅡ進行B、C基因型3’端置換發(fā)現(xiàn)兩個區(qū)域?qū)pⅡ活性均有較大影響。
  第三部分 通過比較證實B、C基因型HBV EnhⅡ活性確實存在差異,

4、并在B型EnhⅡ序列中進行四個C型序列突變,發(fā)現(xiàn)1635-1640與1654位點對B、C基因型EnhⅡ活性差異起重要作用。隨后通過凝膠遷移阻滯實驗初步鑒定出細胞內(nèi)存在與B型1635-1640位點結(jié)合的核蛋白,并通過DNA pull down篩選以及質(zhì)譜鑒定獲得PARP1、SFPQ、NonO、Ku70及Ku80五個候選結(jié)合蛋白。我們的結(jié)果表明轉(zhuǎn)錄因子與EnhⅡ1635-1640位點的結(jié)合及對其活性的影響可能是B、C基因型HBV表現(xiàn)差異的一

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