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文檔簡介
1、目的:目前認為三聚氰胺對生物體(包括人和動物)都具有毒性作用,其主要是對泌尿系產(chǎn)生損害。但是至今仍然缺乏三聚氰胺與三聚氰酸引起的尿路結(jié)石導致腎衰發(fā)生的直接證據(jù)。此外,還存在許多尚未解決的問題。包括:1,對三聚氰胺和三聚氰酸體內(nèi)分布狀況和確切的分布形式未知,對長時間應用的慢性代謝過程未明;2,三聚氰胺及其同系物的可能累加和協(xié)同作用的機制不明;3,三聚氰胺與三聚氰酸等比分布于全身體液,為何僅僅腎臟成為結(jié)晶產(chǎn)生的主要器官,對腎臟以外器官系統(tǒng)的
2、作用還待進一步研究;4,腎衰的發(fā)生與晶體形成之間是否有必然聯(lián)系,中毒后形成結(jié)石和晶體的機制是什么?5,三聚氰胺及其同系物是否直接對腎臟產(chǎn)生損害?以上這些問題都有待于做進一步的深入研究和探討。
因此,本課題重點在于觀察三聚氰胺誘導大鼠腎臟損傷和尿路結(jié)石形成的病理演變過程,探討三聚氰胺導致腎臟損害的機制。
方法:
1、采用含3%(W/W)三聚氰胺的飼料誘導喂養(yǎng)雄性SD大鼠1~4個月。大鼠分成4個組:A,空白組;
3、B1,三聚氰胺飼料喂養(yǎng)3個月后改正常飼料;B2,三聚氰胺飼料喂養(yǎng)3個月后改正常飼料并給予1%(W/V)友萊特(枸櫞酸氫鉀鈉)飲水;B3,三聚氰胺飼料喂養(yǎng)4個月。定期收集大鼠24h尿液檢測pH、肌酐、尿酸、蛋白和三聚氰胺的水平。每月每組各處死四只大鼠,分別采血檢測肌酐,觀察膀胱腫瘤和結(jié)石形成情況并進行結(jié)石成分分析,進行腎臟病理分析(HE和72h Oil Red O染色、免疫組化)。第4個月處死其余全部大鼠進行以上相關指標檢測。
4、2、雄性SD大鼠被使用含3%(W/W)三聚氰胺的飼料喂3個月。隨機分為4個組:A,空白對照組,喂正常飼料和飲用正常飲水;B,結(jié)石誘導組,喂養(yǎng)含三聚氰胺的顆粒飼料和飲用正常飲水;C,喂養(yǎng)含三聚氰胺顆粒的飼料和飲用含?;撬岬乃?2%);D,喂正常飼料和飲用?;撬岬乃?。按時采集大鼠24h尿液測pH、肌酐、尿酸、蛋白、8-IP、H2O2和Mel的水平。觀察大鼠死亡狀況、分析組織病理的改變。第3個月殺死全部大鼠,分別抽血測量肌酐,分析腎臟病理(H
5、E和Oil Red O染色、免疫組化)及線粒體分離和檢測。
結(jié)果:
1、與空白組比較,三聚氰胺誘導組大鼠尿液三聚氰胺的水平隨藥物暴露時間的增加而增加,同時大鼠尿蛋白明顯增多,尿肌酐排泄量減少,肌酐清除率降低,腎臟/體重比值增加,但各組尿PH和尿酸無明顯差異。誘導后一個月即觀察到膀胱內(nèi)大量結(jié)石形成,電噴霧質(zhì)譜和紅外光譜分析證實結(jié)石成分為三聚氰胺磷酸鹽,未發(fā)現(xiàn)尿酸存在。病理分析可見大鼠腎臟內(nèi)三聚氰胺晶體沉積,腎臟上皮和間
6、質(zhì)損傷發(fā)生,并隨著藥物暴露時間的增加腎臟炎癥和纖維化進行性發(fā)展。但誘導4個月未發(fā)現(xiàn)膀胱腫瘤發(fā)生。誘導3個月后停藥2周,大鼠尿液中已經(jīng)檢測不到三聚氰胺的存在。停藥后4周,全部大鼠膀胱均未發(fā)現(xiàn)結(jié)石存在,而大鼠腎功能明顯改善,腎臟病理損傷情況明顯減輕。另外,與B1組比較,使用友萊特(B2組)可促進大鼠腎功能的改善(血清肌酐降低)。
2、和空白組對比,實驗組大鼠尿液三聚氰胺的水平有藥物依賴性,而且大鼠尿蛋白顯著變多,尿肌酐變少,肌酐清
7、除率下降,腎臟/體重比值增大;病理學分析可見三聚氰胺晶體主要集中在腎小管腔內(nèi),腎臟間質(zhì)損傷明顯,并隨著藥物暴露時間的增加腎臟炎癥和纖維化進行性發(fā)展;與B組比較,?;撬幔–組)干預后大鼠腎功能的改善無明顯變化(血清肌酐,尿蛋白降低不明顯),H2O2及線粒體氧化檢測指標SOD,GSH-PX的數(shù)值在兩組之間沒有顯著性的差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1、三聚氰胺可誘導大鼠尿路結(jié)石形成和發(fā)生腎臟損傷,結(jié)石主要集中在內(nèi)髓區(qū)腎小
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