陽(yáng)離子磷酸膽堿聚合物載AT1受體的siRNA對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞AT1受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察新型陽(yáng)離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70能否有效地轉(zhuǎn)染針對(duì)AT1受體的小干擾RNA(AT1-R siRNA)至人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)及轉(zhuǎn)染后對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞AT1受體表達(dá)的影響，這可能為MPC30-DEA70作為基因載體在心血管疾病中的運(yùn)用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1.應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳表征具有不同比值的MPC30-DEA70(N)與s

2、iRNA(P)(N/P=0，1，3，5，10和15∶1)的復(fù)合物。2.將不同比例的MPC30-DEA70/AT1-R siRNA基因復(fù)合物轉(zhuǎn)染至人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，應(yīng)用倒置熒光顯微鏡(FM)檢測(cè)其細(xì)胞內(nèi)的定位及分布，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率及熒光強(qiáng)度。3.最后以較佳配比復(fù)合物(N/P=1，3，5和10∶1)轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞，用Western blot法和RT-PCR法檢測(cè)AT1受體蛋白及mRNA的表達(dá)情況。

3、　　結(jié)果：1.不同N/P比值的PC復(fù)合物在電泳中可見(jiàn)不同程度的電泳遲滯現(xiàn)象，隨電性增強(qiáng)而顯著。2.倒置熒光顯微鏡觀察到MPC30-DEA70/siRNA復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)，提示其有效的細(xì)胞內(nèi)定位。流式細(xì)胞術(shù)顯示隨N/P比值的增大，轉(zhuǎn)染效率明顯增大，熒光強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)，與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)。3.Western blot法和RT-PCR法顯示PC基因復(fù)合物可使AT1受體的蛋白和mRNA表達(dá)的下降，且隨著N/P比值的增大，