陰道毛滴蟲與人型支原體共生關系及其相關生物學特性的研究.pdf

1、中山大學博士學位論文陰道毛滴蟲與人型支原體共生關系及其相關生物學特性的研究姓名：肖建春申請學位級別：博士專業(yè)：動物學指導教師：倫照榮20060601肖建春陰道毛滴蟲與人型支原體共生關系及“相關生物學特性的研究中山大學博士學位論2006(p=00038)及感染人型支原體(p=O033)這兩種表型與蟲株在捌狀聚類圖上的位置有明顯的相關性。而ITS的點突變與人型支原體感染和甲硝唑抗性之間沒有明顯的相關性(p005)。我們的研究結果顯示人型支原

2、體在毛滴蟲體內的共生顯著地影響了毛滴蟲的RAPD圖譜(，)=0002)及其后的分子進化分析(p=O003)。通過分析用強力霉素處理前后感染人型支原體的陰道毛滴蟲的RAPD的圖譜變化，發(fā)現(xiàn)圖譜中336％的擴增條帶是來源于人型支原體，而且人型支原體去除后，毛滴蟲蟲株間的遺傳相似系數(shù)從70％增加到75％(j，=o003)，顯示它們有著更為密切的遺傳關系。利用蟲株處理前后的RAPD數(shù)據(jù)構建的6株陰道毛滴蟲的系譜樹狀圖，顯示出不同的聚類方式(p=

3、O003)。因此，我們認為，使用RAPD方法分析毛滴蟲的基因多態(tài)性時，應首先檢測其是否感染人型支原體，以免得出錯誤的結淪。陰道毛滴蟲蛋白水解酶分析結果表明，水解酶的活性表現(xiàn)出強烈的pH依賴性，表現(xiàn)在毛滴蟲具有強烈的酸性蛋白水解酶活性，但缺乏堿性蛋白水解酶活性。蟲株堿性蛋白水解酶的缺乏可能是生物適應環(huán)境長期進化的結果。雖然，每個蟲株的酸性蛋白水解酶譜都比較近似，但活性有顯著差異。我們的結果提示毛滴蟲可能通過降解特異抗體(IgG)來逃避宿主

4、對它的攻擊，其降解能力呈現(xiàn)時問和濃度依賴性，且不同蟲株降解lgO的能力有量的差別。率先利用MGE—PCR方法研究陰道毛滴蟲蟲株問的分子差異，結果顯示MGEPCR較之RAPD分析可檢測到蟲株間更多的遺傳變異度(平均遺傳距離分別為493％和314％)，該法具有良好的穩(wěn)定性與重復性。因此，MGE可作為種內遺傳變異的分子標記，為毛滴蟲診斷及進化關系分析等提供更多的理論依據(jù)。通過分析流行中國(廣州)的陰道毛滴蟲蟲株的核糖體基因序列(ITS、28S

5、rRNA)，進一步確證它們的高度保守性，同時表明了雖然毛滴蟲是一種古老的真核生物，但可能是最近才開始出現(xiàn)分歧。本論文首次發(fā)現(xiàn)陰道毛滴蟲感染人型支原體與其甲硝唑抗藥性之問存在相關性，這一發(fā)現(xiàn)對陰道毛滴蟲流行病學及其相關的基礎研究具有重要的指導意義。通過深入研究人型支原體在陰道毛滴蟲體內的共生對毛滴蟲分子進化的影響，表明共生的人型支原體顯著地改變了毛滴蟲的分子圖譜分析的結果，指出使用RAPD方法分析毛滴蟲的基因多態(tài)性時，有必要檢測其是否感染