正常家兔頸椎椎間盤內(nèi)神經(jīng)分布的實驗性研究.pdf

1、目的：頸性眩暈的發(fā)病機制比較復(fù)雜，在眾多的病因中交感神經(jīng)因素起到了非常重要的作用。然而關(guān)于交感神經(jīng)導(dǎo)致頸性眩暈的具體機制目前還不太清楚。近年來，經(jīng)皮激光椎間盤減壓術(shù)治療頸性眩暈取得了顯著的療效。這意味著頸椎椎間盤和椎動脈之間可能存在著某些必然的聯(lián)系，而這種聯(lián)系的中介很可能就是位于椎動脈和椎間盤及其周圍組織內(nèi)的神經(jīng)纖維，因此頸椎椎間盤內(nèi)的神經(jīng)分布情況就成了我們最關(guān)注的問題。到目前為止，關(guān)于椎間盤神經(jīng)分布的研究很多，但是這些研究主要集中在腰

2、椎間盤，關(guān)于頸椎椎間盤神經(jīng)分布的研究卻很少。研究證實腰椎間盤尤其是退變或突出的腰椎間盤的纖維環(huán)外1/3存在著交感神經(jīng)纖維和感覺神經(jīng)纖維，腰椎間盤內(nèi)的感覺神經(jīng)纖維是由上腰部的背根神經(jīng)節(jié)發(fā)出，通過交感神經(jīng)干、經(jīng)灰交通支分布到腰椎間盤纖維環(huán)的。這些關(guān)于腰椎間盤神經(jīng)分布的研究為關(guān)于頸椎椎間盤神經(jīng)分布的研究提供了可以借鑒的經(jīng)驗。本研究的目的是應(yīng)用辣根過氧化物酶(HRP)示蹤方法和免疫組織化學(xué)染色方法，對正常家兔頸椎椎間盤進行研究，觀察正常家兔頸椎

3、椎間盤周圍是否存在神經(jīng)纖維，如果存在神經(jīng)纖維則進一步確定神經(jīng)的種類，并確定頸椎椎間盤內(nèi)感覺神經(jīng)纖維的來源。作為對比，同時進行腰椎間盤神經(jīng)的免疫組織化學(xué)染色。 方法：本實驗選取15只日本大耳白兔為實驗對象，隨機將實驗動物分為兩組進行實驗，分別為椎間盤(IVD)組5只和背根神經(jīng)節(jié)(DRG)組10只。 1、在椎間盤(IVD)組，選取C<,5/6>頸椎椎間盤標本，制成厚度為5μm的石蠟切片。并進行蘇木精．伊紅染色，觀察頸椎椎間盤

4、的正常組織學(xué)形態(tài)；選取C<,6/7>頸椎椎間盤標本，石蠟切片，切片厚度為5μm，每個椎間盤切取三張切片，分別進行一般神經(jīng)標記物神經(jīng)絲蛋白(NF)、傳遞傷害性刺激的感覺神經(jīng)標志物P物質(zhì)(SP)和交感神經(jīng)的標志物神經(jīng)肽Y的C端連接肽(CPON)的免疫組織化學(xué)染色。觀察正常家兔頸椎椎間盤內(nèi)神經(jīng)生長情況。作為對照，同時選取L<,4/5>、L<,5/6>腰椎間盤標本分別進行蘇木精．伊紅染色和椎間盤免疫組織化學(xué)染色。 2、背根神經(jīng)節(jié)組分為交

5、感神經(jīng)完整組(nontreated group)和交感神經(jīng)切斷組(sympathectomized group)，每組5只，進行辣根過氧化物酶示蹤實驗。在交感神經(jīng)完整組內(nèi)，保留家兔交感神經(jīng)的完整性；在交感神經(jīng)切斷組內(nèi)，于頸部交感干靠近頸下神經(jīng)節(jié)的下方切斷交感干。兩組分別進行椎間盤后方神經(jīng)纖維的辣根過氧化物酶神經(jīng)示蹤實驗。應(yīng)用微量注射器在兩組實驗對象的C<,4/5>、C<,5/6>、C<,6/7>椎間盤后緣注射辣根過氧化物酶。動物存活48

6、小時后將動物處死，取雙側(cè)頸部(C<,4～8>)和上胸部(T<,1-5>)脊髓節(jié)段的背根神經(jīng)節(jié)，觀察神經(jīng)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元的標記情況。 結(jié)果：腰椎間盤纖維環(huán)周圍組織存在著豐富的神經(jīng)纖維。在腰椎間盤切片中，纖維環(huán)后方存在NF免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維的切片數(shù)為4個，陽性率為80％；CPON免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維的切片數(shù)為3個，陽性率為60％；SP免疫反應(yīng)陽性纖維的切片數(shù)為2個，陽性率為40％。同時在腰椎間盤的前方我們也發(fā)現(xiàn)了各類免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維

7、的存在。在頸椎纖維環(huán)切片內(nèi)，頸椎椎間盤纖維環(huán)的后方存在NF免疫陽性纖維的切片數(shù)為4個，陽性率為80％；頸椎椎間盤纖維環(huán)的后方組織內(nèi)存在COPN免疫陽性纖維的切片數(shù)為1個，陽性率為20％；沒有發(fā)現(xiàn)SP免疫陽性神經(jīng)纖維的存在。 在辣根過氧化物酶示蹤實驗中，在交感神經(jīng)完整組和交感神經(jīng)切斷組的背根神經(jīng)節(jié)中，均未發(fā)現(xiàn)被HRP標記的神經(jīng)元胞體。 結(jié)論：頸椎椎間盤周圍存在著神經(jīng)纖維，其中包括CPON免疫反應(yīng)陽性的交感神經(jīng)纖維。頸椎椎間