聯(lián)合應(yīng)用氨氯地平和阿托伐他汀對高血壓大鼠心室肥厚的干預(yù)研究.pdf

1、左室肥厚是高血壓患者未來心血管病死亡和致殘的獨立危險因素。左室肥厚最初是對壓力負(fù)荷過重的代償性應(yīng)答，但逐漸演變?yōu)槭Т鷥斝孕募≈貥?gòu)，誘發(fā)心臟舒張及收縮功能下降、冠脈儲量減少、心律失常及心臟自主神經(jīng)活性失調(diào)及心律失常，最終導(dǎo)致充血性心力衰竭和猝死。逆轉(zhuǎn)左室肥厚能夠明顯改善高血壓患者的預(yù)后。近年來，探討預(yù)防和逆轉(zhuǎn)左室肥厚的優(yōu)化治療是高血壓治療的一處活躍領(lǐng)域。
　　 左室肥厚的病理特征主要包括心肌細(xì)胞肥大、心臟成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)

2、沉積、心肌壁內(nèi)小血管重構(gòu)。引發(fā)左室肥厚的致病因素主要包括壓力負(fù)荷過重，腎素一血管緊張素一醛固酮系統(tǒng)（RAAS）激活，氧化應(yīng)激，炎癥因子上調(diào)（如TNF-α），轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）、內(nèi)皮素（ET-1）、心鈉素（ANP）等細(xì)胞因子和血管活性物質(zhì)表達(dá)增多等。此外，新近研究發(fā)現(xiàn)，作為腫瘤壞死因子超家族成員，RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)不僅參與骨的形成，還與胚胎心臟發(fā)育、心肌梗死后心室重構(gòu)、免疫-炎癥性心肌病等有密切關(guān)系，是一組多功能的

3、細(xì)胞因子系統(tǒng)。臨床資料顯示RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)可能參與了高血壓左室肥厚的進(jìn)程。
　　 研究顯示，盡管降壓治療是逆轉(zhuǎn)左室肥厚的重要因素，但并不是唯一因素。實驗和臨床證據(jù)均顯示，抗氧化及抗炎治療可以延緩心室肥厚及心力衰竭的進(jìn)程。在諸多降壓藥物中，氨氯地平，一種長效的二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，已被證實在降壓作用之外，還可能通過抗氧化及抗炎作用逆轉(zhuǎn)心室肥厚。他汀類藥物，即3-羥基-3-甲基-戊二酸單酰輔酶A還原酶抑制劑（HMG

4、-CoA reductase inhibitors），除強效降脂外，還具有不依賴于降脂的多效性作用，如直接抗氧化、抗炎及保護(hù)血管內(nèi)皮等，在臨床上廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療心血管疾病。近來研究報道他汀可能通過多效性作用預(yù)防心肌肥厚和心力衰竭的發(fā)生。
　　 本研究以36周齡SHR大鼠為研究對象，通過觀察氨氯地平和阿托伐他汀單藥和聯(lián)合用藥對SHR大鼠心肌肥厚、心臟舒張功能失調(diào)、心肌組織氧化應(yīng)激狀態(tài)、炎癥因子調(diào)控、MMPs/TIMPs系統(tǒng)平衡

5、、OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)表達(dá)等的干預(yù)效應(yīng)，了解在氨氯地平治療的基礎(chǔ)上，加用阿托伐他汀能否進(jìn)一步改善心室肥厚及心臟功能，并探討這一聯(lián)合效應(yīng)的潛在藥理機(jī)制，為二者聯(lián)合用藥治療高血壓左室肥厚提供新的思路和實驗依據(jù)。
　　 第一部分聯(lián)合應(yīng)用氨氯地平及阿托伐他汀對高血壓大鼠心室肥厚的干預(yù)效應(yīng)
　　 目的：了解氨氯地平、阿托伐他汀單藥及聯(lián)合用藥對高血壓大鼠左室肥厚及心臟功能的干預(yù)效應(yīng)，對血漿及心肌AngⅡ水平的影響，探討聯(lián)

6、合用藥對高血壓心室肥厚及心臟功能的改善是否具有協(xié)同效應(yīng)。
　　 方法：雄性Wistar-Kyoto大鼠（WKY大鼠）作為正常血壓WKY對照組，雄性SHR大鼠隨機(jī)分為4組，即SHR對照組、氨氯地平組（10 mg/kg/d）、阿托伐他汀組（10 mg/kg/d）、聯(lián)合用藥組（氨氯地平10 mg/kg/d及阿托伐他汀10 mg/kg/d）。灌胃給藥12 wk后，應(yīng)用形態(tài)測量學(xué)測定左室質(zhì)量指數(shù)（INMI），經(jīng)胸超聲心動圖測定心室壁厚度、

7、左室重量（LVW）及心臟功能，血流動力學(xué)測定左室壓力及心功能，ELASA法測定血漿BNP含量。用HE染色及Masson三色染色觀察心肌細(xì)胞肥大程度及心肌間質(zhì)膠原沉積情況，生化法檢測心肌羥脯氨酸含量。用RT-PCR法檢測心肌組織ANP、β-MHC、ProcollagenⅠ、TGF-β mRNA表達(dá)，放免法測定大鼠血漿及心肌AngⅡ含量。
　　 結(jié)論：氨氯地平和阿托伐他汀聯(lián)合用藥對高血壓左室肥厚及舒張功能的改善具有協(xié)同效應(yīng)，其機(jī)制可

8、能與聯(lián)合用藥降低循環(huán)及心肌AngⅡ含量有關(guān)。
　　 第二部分聯(lián)合應(yīng)用氨氯地平及阿托伐他汀對高血壓大鼠心肌氧化應(yīng)激的干預(yù)作用
　　 目的：觀察氨氯地平和阿托伐他汀單藥及聯(lián)合用藥對SHR大鼠心肌組織氧化應(yīng)激的影響，探討聯(lián)合用藥改善高血壓左室肥厚及舒張功能障礙的可能機(jī)制。
　　 方法：采用生化法測定血清TG、TC、HDL、LDL含量，雙抗體夾心ELISA法測定血清氧化低密度脂蛋白（oxLDL）含量。采用超氧化物陰離子熒

9、光探針染色法測定心肌組織原位的超氧陰離子水平，通過測定心肌組織丙二醛（Maleic Dialdehyde，MDA）水平來間接評估心肌組織的氧化應(yīng)激狀態(tài)。采用光澤精化學(xué)增強發(fā)光法測定左室心肌組織的NADPH氧化酶活動度。采用黃嘌呤氧化酶法測定心肌組織銅/鋅超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）活性。Western blot技術(shù)分析心肌組織NADPH氧化酶亞基p22phox、p40phox、p47Phox、Rac-1及Cu/ZnSOD的蛋白表

10、達(dá)。
　　 結(jié)論：SHR大鼠血清oxLDL含量、心肌組織DHE染色強度及MDA水平明顯高于WKY大鼠，表明氧化應(yīng)激參與了SHR大鼠心肌肥厚及心臟舒張功能失調(diào)的發(fā)生與發(fā)展。氨氯地平和阿托伐他汀可能通過抑制NADPH氧化酶亞基轉(zhuǎn)位和活性，降低氧化應(yīng)激，改善SHR大鼠心肌肥厚及心臟功能。聯(lián)合應(yīng)用氨氯地平和阿托伐他汀可能通過對氧化應(yīng)激的協(xié)同干預(yù)效應(yīng)，改善心肌肥厚和心臟功能。
　　 第三部分聯(lián)合應(yīng)用氨氯地平及阿托伐他汀對高血壓大鼠

11、心肌促炎癥因子的干預(yù)作用
　　 目的：觀察氨氯地平和阿托伐他汀單藥及聯(lián)合用藥對SHR大鼠循環(huán)hs-CRP、TNF-α、IL-1β水平的影響，及對心肌組織TNF-α、IL-1β、NF-κBp65、IκB-α蛋白表達(dá)的影響，探討聯(lián)合用藥改善高血壓左室肥厚及舒張功能障礙的潛在藥理機(jī)制。
　　 方法：用ELISA法測定大鼠血清hs-CRP含量，放免法測定血清TNF-α、IL-1含量。HE染色觀察炎癥細(xì)胞浸潤情況，用Western

12、 blot技術(shù)檢測大鼠心肌TNF-α、IL-1β、NF-κB、IκB-α的蛋白表達(dá)，免疫組化觀察NF-κ3 p65的核移位情況。
　　 結(jié)論：氨氯地平或（和）阿托伐他汀可能通過下調(diào)心肌組織TNF-α、IL-1β、NF-κB p65的蛋白表達(dá)，上調(diào)IκB-α的蛋白表達(dá)，改善心肌肥厚和心臟舒張功能失調(diào)，聯(lián)合用藥對心肌組織炎癥應(yīng)答的抑制效果最佳。
　　 第四部分聯(lián)合應(yīng)用氨氯地平和阿托伐他汀對高血壓大鼠心肌MMPs/TIMPs的

13、干預(yù)作用
　　 目的：了解MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2在自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織中的表達(dá)情況，并探討氨氯地平和阿托伐他汀單藥和聯(lián)合用藥對MlMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的干預(yù)作用。
　　 方法：用明膠酶圖法測定明膠酶MMP-2及MMP-9的活性，用Western blot技術(shù)檢測大鼠心肌MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的蛋白表達(dá)，用RT-PCR檢測MMP-2、M

14、MP-9、TIMP-1及TIMP-2的mRNA水平。
　　 結(jié)論：氨氯地平或（和）阿托伐他汀降低了SHR大鼠心肌組織MMP-2、MMP-9的活性、蛋白及mRNA表達(dá)，以聯(lián)合用藥效果最佳。氨氯地平或（和）阿托伐他汀可能通過干預(yù)MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1系統(tǒng)失衡，改善高血壓大鼠的心肌間質(zhì)纖維化。
　　 第五部分 RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)在高血壓大鼠心肌肥厚中的作用及氨氯地平、阿托伐他汀的干預(yù)效

15、應(yīng)
　　 目的：了解SHR大鼠心肌肥厚過程中RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)的變化及氨氯地平和阿托伐他汀對它的干預(yù)作用。
　　 方法：用免疫組化法檢測RANKL、RANK、OPG的蛋白表達(dá)及組織定位，用Western blot技術(shù)檢測大鼠心肌RANKL、RANK、OPG的蛋白表達(dá)，用RT-PCR檢測RANKL、RANK、OPG的mRNA表達(dá)，
　　 結(jié)論：SHR大鼠心肌組織RANKL、RANK、OPG蛋白及mRN