AIHA-Evans綜合征外周血淋巴細胞CD80、CD86和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　 目前，自身免疫性溶血性貧血（autoimmune hemolytic anemia，AIHA）/Evans綜合征的確切病因和發(fā)病機制仍未完全闡明，復發(fā)率及病死率仍較高，給家庭和社會均造成較大的經(jīng)濟負擔。即使經(jīng)過治療方法的改進，采用腎上腺皮質(zhì)激素、免疫抑制劑甚至脾切除治療AIHA/Evans綜合征，但仍有反復發(fā)作者，此類病例療效差，病程僅數(shù)月至數(shù)年不等，病死率高。這提示仍有其他免疫異常機制在該病的發(fā)病過程中

2、起作用，且未被發(fā)現(xiàn)和缺乏相應的治療措施。
　　 日益增多的證據(jù)顯示包括T細胞亞群功能失衡和共刺激分子表達異常等細胞免疫異常機制在自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)中起重要作用。目前，已有大量證據(jù)論證了CD80和CD86共刺激因子控制體液免疫和細胞免疫的重要性。同時，也有大量的文獻認為CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞在誘導和維持外周自身免疫耐受中至關重要的作用，在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。有文

3、獻報道在調(diào)節(jié)性T細胞的生長和動態(tài)平衡中，CD80和CD86起了重要的作用;調(diào)節(jié)性T細胞從抗原提呈細胞中獲得CD86后能提高它們的抑制作用。Mqadmi等應用CD25單克隆抗體處理C57/B16小鼠去除其體內(nèi)的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞，然后將異體紅細胞注入C57/B16小鼠的腹腔，制成小鼠的AIHA模型，發(fā)現(xiàn)缺失CD25的C57/B16小鼠AIHA的發(fā)生率從30％升至90％，將從小鼠脾臟純化的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞注入小鼠體

4、內(nèi)，可以阻止自身抗體的產(chǎn)生，減輕溶血的發(fā)作，而注入CD4+CD25-調(diào)節(jié)性T細胞，沒有此作用，從而在動物模型中證明了CD4+D25+調(diào)節(jié)性T細胞在AIHA的發(fā)病機制中起著重要作用。而隨后我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)AIHA發(fā)作患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例明顯減少，之后我們研究外周血淋巴細胞共刺激分子CD80、CD86在AIHA/Evans綜合征患者中存在異常。而共同研究共刺激分子CD80、CD86和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞與AI

5、HA或Evans綜合征的文獻卻較少見。如果我們繼續(xù)深入研究AIHA/Evans綜合征的免疫異常機制，將很可能揭示新的免疫異常機制并因而發(fā)現(xiàn)新的治療措施，提高治療水平，從而降低復發(fā)率和病死率，造?；颊吆蜕鐣哂休^大的社會和經(jīng)濟意義。
　　 研究方法:
　　 1.選取汕頭大學醫(yī)學院附屬粵北人民醫(yī)院2010年4月～2013年2月期間診治的初發(fā)AIHA或Evans綜合征患者24例次為發(fā)作組，其中男6人共7例次，女12人17例次

6、，AIHA18例次，均為溫抗體型AIHA患者，Evans綜合征6例次，中位年齡49歲（18～74歲）;11例次同期診治的AIHA/Evans綜合征治療后部分緩解或完全緩解者為緩解組，其中男性2人共3例次，女性8人8例次，中位年齡44歲（18～72歲）;27人27例次均為同期體檢健康者為正常對照組，均無腫瘤或自身免疫性疾病病史，其中男10例次，女17例次，中位年齡51歲（19～72歲）。
　　 2.對各組標本進行外周血活細胞免疫熒

7、光標記，使用FACS-Calibur流式細胞儀檢測人PBLsCD80、CD86和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞。檢測結果分別以PBLsCD80、CD86占PBLs的百分率和PBLsCD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞占PBLs的百分率表示。
　　 3.統(tǒng)計方法:以SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，以p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。
　　 4.根據(jù)本研究所得出的統(tǒng)計結果，結合國內(nèi)外文獻探討

8、AIHA/Evans綜合征的發(fā)病機制。
　　 結果:
　　 1.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組、緩解組和正常對照組PBLsCD80表達水平變化無統(tǒng)計學意義，分別為（6.59±7.67）％VS（4.20±5.89）％(P＞0.05)，（4.51±2.83）％ VS(4.20±5.89)％(P＞0.05)。
　　 2.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLs共刺激因子CD86表達水平較正常對照組升高（5.90±4.

9、82）％VS（2.69±1.35）％(P＜0.05)，而緩解組與正常對照組PBLsCD86表達水平變化無統(tǒng)計學意義（5.54±5.88）％VS（2.69±1.35）％(P＞0.05)。
　　 3.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLsCD4+T細胞表達水平較正常對照組明顯下降（25.63±12.01）％VS（36.44±7.76）％(P＜0.01)，而緩解組與正常對照組PBLsCD4+T細胞表達水平變化無統(tǒng)計學意義（29.08

10、±12.29）％VS(36.44±7.76)％(P＞0.05)。
　　 4.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLsCD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平較正常對照組及治療后緩解組明顯下降，（2.91±2.28）％VS（5.86±2.28）％(P＜0.01)，(2.89±2.30)％VS(5.37±3.91)％(P＜0.01)。
　　 5.AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLs的CD80、CD86表達水平分別與CD4+

11、CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平均無明顯相關性（P均＞0.05）。
　　 6.PBLs的CD80、CD86、CD4+和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的表達水平分別與性別、年齡、血紅蛋白濃度、網(wǎng)織紅細胞百分比、總膽紅素、間接膽紅素均無明顯相關性（P均＞0.05）。
　　 結論:
　　 1.本研究通過流式細胞術檢測AIHA/Evans綜合征發(fā)作組、治療后緩解組及正常對照組發(fā)現(xiàn):AIHA/Evans綜合征發(fā)作組PBLs的

12、CD86表達水平較正常對照組明顯升高，而PBLs的CD4+T細胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平較正常對照組卻明顯降低;正常對照組與緩解組PBLs的CD86、CD4+T細胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平變化無統(tǒng)計學意義，且治療后緩解組較發(fā)作組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平明顯上升。本研究結果提示AIHA/Evans綜合征發(fā)病時PBLs的CD86、CD4+T細胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平同時存在異常

13、，可能參與了AIHA/Evans綜合征發(fā)病時的免疫異常機制。
　　 2.AIHA/Evans綜合征發(fā)病時PBLs的CD80、CD86表達水平分別與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平均無明顯相關性。
　　 3.PBLs CD80、CD86、CD4+和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表達水平與性別、年齡、血紅蛋白濃度、網(wǎng)織紅細胞百分比、總膽紅素、間接膽紅素的均無相關性，提示上述指標表達水平不能反映AIHA/Evans綜合征