丙烯腈對(duì)細(xì)胞活性及遺傳物質(zhì)的影響研究.pdf

1、目的：丙烯腈(Acrylonitrile，AN)是有機(jī)合成中的重要單體，屬于高毒類(lèi)化學(xué)物質(zhì)，可以引起接觸人群的急慢性中毒，中樞神經(jīng)是主要的受作用系統(tǒng)。近年來(lái)，其遠(yuǎn)期效應(yīng)(致癌性、致畸性、致突變性)越來(lái)越受到人們的關(guān)注。AN是確定的動(dòng)物致癌物，人群流行病學(xué)調(diào)查也發(fā)現(xiàn)接觸者肺癌發(fā)病率升高，但致癌機(jī)制還未明確。本研究旨在了解AN對(duì)細(xì)胞活性和遺傳物質(zhì)的影響，從DNA損傷、修復(fù)以及凋亡方面探討AN可能的致癌機(jī)制，為有效保護(hù)AN職業(yè)暴露人群健康提供

2、依據(jù)。 方法：本研究主要分為三部分：第一部分通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)拒染法和MTT比色法檢測(cè)不同濃度的AN對(duì)V79細(xì)胞作用不同時(shí)間后細(xì)胞存活率的變化，了解濃度-時(shí)間-毒性效應(yīng)關(guān)系；第二部分采用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)AN對(duì)V79細(xì)胞(中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維細(xì)胞)的DNA損傷程度及類(lèi)型，同時(shí)用該方法比較相同劑量的AN對(duì)正常細(xì)胞株V79細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞株SHG4細(xì)胞(腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞)DNA的損傷及修復(fù)作用，用熒光探針染色法在激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)測(cè)AN對(duì)V79

3、細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量的影響；第三部分采用PI單標(biāo)法通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)AN對(duì)V79細(xì)胞和SHG4細(xì)胞周期分布的影響，AO/EB雙染法觀(guān)察V79細(xì)胞在AN作用下凋亡形態(tài)的改變，探討AN對(duì)遺傳物質(zhì)的影響及可能的作用機(jī)制。 結(jié)論：AN可以引起V79細(xì)胞急性毒性，細(xì)胞存活率呈濃度-時(shí)間依賴(lài)性下降，臺(tái)盼藍(lán)拒染法和MTT比色法檢測(cè)的毒性作用效應(yīng)譜不完全一致；AN可以引起V79細(xì)胞發(fā)生單鏈斷裂，且隨著染毒劑量的增大損傷程度加重，在本研究實(shí)

4、驗(yàn)條件下未檢測(cè)到AN有致交聯(lián)的作用，相同劑量的AN引起V79細(xì)胞和SHG4細(xì)胞DNA損傷的程度比較接近，且較低染毒劑量下的損傷能被修復(fù)，而劑量較高時(shí)在24h內(nèi)均未能修復(fù)；熒光定量分析顯示V79細(xì)胞內(nèi)ROS含量隨著AN染毒劑量的增加而升高，提示氧化損傷可能在AN引起DNA斷裂中發(fā)揮重要作用：細(xì)胞周期分布結(jié)果提示，低劑量AN能將V79細(xì)胞阻滯在G2期阻止受損細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂，劑量較高時(shí)細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯以利于受損細(xì)胞進(jìn)行有效修復(fù)，AN主要將