丙烯腈、姜黃素對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的生物特性的影響.pdf

1、目的:探討丙烯腈(acrylonitrile，ACN)對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(Humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUC-MSCs)生物學(xué)特性的影響，為丙烯腈對(duì)人體損害機(jī)制的研究提供新的視角;研究姜黃素(Curcumin，CUR)對(duì)hUC-MSCs生物學(xué)特性的影響，探討姜黃素對(duì)hUC-MSCs可能的影響。
　　 方法:(1)采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)hUC-MSCs，通過(guò)形態(tài)學(xué)特征、表面標(biāo)記、

2、成骨誘導(dǎo)等鑒定其生物學(xué)特性。(2)用MTT法檢測(cè)ACN對(duì)hUC-MSCs增殖的影響，通過(guò)濃度梯度篩選選取0.1μg/mL作為后續(xù)試驗(yàn)的作用濃度;成骨誘導(dǎo)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，誘導(dǎo)14天后，進(jìn)行ALP細(xì)胞化學(xué)染色比較誘導(dǎo)前后的形態(tài)學(xué)差異，提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)ALP表達(dá)水平的差異;分別選擇不同濃度ACN作用不同時(shí)間后，RT-PCR檢測(cè)hUC-MSCs細(xì)胞因子的表達(dá)情況;選擇一種抗氧化劑N-乙酰半胱胺酸(NA

3、C)拮抗ACN對(duì)hUC-MSCs的損傷，通過(guò)MTT法篩選后確定3mMNAC為保護(hù)劑量作為后續(xù)試驗(yàn)濃度。用3mMNAC預(yù)處理hUC-MSCs30min后，分別加入不同濃度的ACN，MTT檢測(cè)NAC拮抗ACN對(duì)hUC-MSCs的氧化作用;流式細(xì)胞儀分析ACN對(duì)hUC-MSCs凋亡以及細(xì)胞周期的影響。(3)MTT法檢測(cè)CUR對(duì)hUC-MSCs增殖的影響;成骨誘導(dǎo)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，14天后，進(jìn)行ALP細(xì)胞化學(xué)染色，并提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成

4、cDNA，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)ALP表達(dá)水平的差異;流式細(xì)胞儀分析CUR對(duì)hUC-MSCs細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果:(1)ACN抑制hUC-MSCs增殖，并且隨著濃度增高作用時(shí)間延長(zhǎng)OD值逐漸減小;成骨誘導(dǎo)14天后，ACN組的ALP陽(yáng)性率和ALP基因表達(dá)明顯低于對(duì)照組;不同濃度ACN作用不同時(shí)間后，處理組的hUC-MSCs因子的表達(dá)明顯低于對(duì)照組。MTT結(jié)果表明與對(duì)照組相比，NAC預(yù)處理組細(xì)胞OD值更高;細(xì)胞周期和凋亡檢測(cè)的