間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、[研究背景]
　　 隨著B超、CT、MRI等影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用及臨床診斷水平的提高，原發(fā)性腎上腺腫瘤的檢出率也明顯提高。腎上腺腫瘤(已)經(jīng)被認(rèn)為是人類最常見的腫瘤之一，也越來越被臨床醫(yī)生所重視。腎上腺腫瘤往往都具有內(nèi)分泌功能，腫瘤分泌的過量的腎上腺激素引起人體相應(yīng)的內(nèi)分泌功能的紊亂，表現(xiàn)為高血壓、庫欣綜合征、肥胖等，短期內(nèi)即可引起嚴(yán)重的心血管的損害，如心肌肥厚、腦血管意外、冠心病等。大多數(shù)腎上腺的惡性腫瘤也具有內(nèi)分泌功能，早

2、期具有與腎上腺良性腫瘤相似的臨床表現(xiàn)，此外，還表現(xiàn)為男性化、女性化、副瘤綜合征等。盡管大多數(shù)的腎上腺腫瘤都是良性腫瘤，但是臨床上絕不能忽視腎上腺惡性腫瘤，其對人體的危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于良性腫瘤。腎上腺良惡性腫瘤的預(yù)后差別極大，良性腫瘤經(jīng)手術(shù)切除可以根治，而惡性腫瘤往往易于發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。惡性腫瘤常常表達(dá)多種耐化療藥物基因，化療效果很差，對放療也不敏感。放化療對腫瘤病人的治療和改善生存率幫助不大，目前對于腎上腺的惡性腫瘤主要治療方法是手術(shù)切除。腎

3、上腺良、惡性腫瘤早期的臨床表現(xiàn)相似、影像學(xué)上無特征性的表現(xiàn)，鑒別診斷十分困難。由于腎上腺皮質(zhì)癌的組織結(jié)構(gòu)與形態(tài)和腎上腺皮質(zhì)腺瘤相像，常規(guī)病理也很難鑒別，有時需結(jié)合臨床表現(xiàn)、大體、鏡下組織學(xué)形態(tài)和免疫組化綜合判斷。30％～85％的腎上腺皮質(zhì)癌病人診斷時已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，對于無功能性腎上腺皮質(zhì)癌診斷時遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率更高，很多病人診斷時已失去了手術(shù)機(jī)會。相比腎上腺皮質(zhì)癌，腎上腺惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷更為困難，常規(guī)病理檢查亦不能區(qū)分嗜鉻細(xì)胞瘤的良惡性，只

4、有出現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶才能診斷為惡性嗜鉻細(xì)胞瘤。因此，盡早鑒別良惡性腫瘤，早期診斷和治療腎上腺惡性腫瘤，對改善腫瘤患者的預(yù)后十分重要。由于在影像學(xué)上及組織學(xué)上均難以鑒別腎上腺腫瘤的良惡性，因此非常有必要從分子水平上對腎上腺腫瘤進(jìn)行研究，探討其生物學(xué)行為，為臨床診斷、治療及判斷預(yù)后提供理論依據(jù)。
　　 間隙連接（gapjunction，GJ）普遍存在于脊椎動物體內(nèi)，是細(xì)胞連接中的一種，由相鄰細(xì)胞膜上的間隙連接蛋白(connexinCx)構(gòu)

5、成。Cx43是第一個被克隆的Cx，目前為止，研究發(fā)現(xiàn)小鼠體內(nèi)有20種connexin基因，人體內(nèi)有21種connexin基因，其中19對為直系同源基因。間隙連接蛋白在人體各種組織均有表達(dá)，如心臟、血管、內(nèi)分泌腺、外分泌腺、肌肉、神經(jīng)組織等。但是，Cx的表達(dá)分布在不同的外界條件刺激和病理狀態(tài)下會有所改變。通過間隙連接相鄰細(xì)胞電信號的可以直接傳遞，營養(yǎng)物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、離子、第二信使、分子量小于1000道爾頓的親水性物質(zhì)的也可以通過間隙連接進(jìn)

6、行交換。間隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞連接通訊(GapJunctionIntercellularCommunicationGJIC)對細(xì)胞的新陳代謝、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、增殖和分化等生理過程起著重要的調(diào)控作用。不同組織內(nèi)的間隙連接具有不同的功能，其功能可分為兩個方面:GJIC非依賴型和GJIC依賴型，前者以Cx單體（未配對的Cx）在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用;后者是兩個細(xì)胞或多個相鄰細(xì)胞的Cx單體耦合形成GJIC，通過GJIC發(fā)揮作用。研究證實(shí)間隙連接蛋白功能主要包括

7、以下幾個方面:①電偶聯(lián)作用:在細(xì)胞間傳遞電信號，促使動作電位的發(fā)生。②細(xì)胞通道作用:相鄰細(xì)胞間的離子、營養(yǎng)物質(zhì)、液體、代謝產(chǎn)物可以迅速交換。③調(diào)控細(xì)胞的生長和分化，參與細(xì)胞的黏附和運(yùn)動，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)。④在胚胎的生長、發(fā)育中調(diào)節(jié)細(xì)胞間信號的傳遞。Cx基因的變異與人類多種疾病有密切關(guān)系，如心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、先天性耳聾、多種皮膚疾病等。人們利用電子顯微鏡、免疫組化、蛋白印跡、PCR等多種實(shí)驗(yàn)手段發(fā)現(xiàn)人類多種惡性腫瘤存在

8、著間隙連接蛋白的表達(dá)異常和間隙連接通訊功能的缺陷。通過轉(zhuǎn)染使細(xì)胞間隙連接蛋白表達(dá)及間隙連接通訊的恢復(fù)可以抑制腫瘤生長甚至逆轉(zhuǎn)惡性腫瘤，間隙連接蛋白基因表現(xiàn)出抑癌基因的特點(diǎn)。研究證實(shí)間隙連接蛋白(Cx)表達(dá)異常與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。
　　 然而，間隙連接蛋白在原發(fā)性腎上腺腫瘤的表達(dá)國內(nèi)未見報道，研究腎上腺腫瘤中間隙連接蛋白的表達(dá)情況，探討其與腫瘤生物學(xué)特征的關(guān)系有助于通過間隙連接蛋白的變化來鑒別腎上腺良惡性腫瘤，有可

9、能為腎上腺惡性腫瘤的治療提供新的思路。
　　 [目的]
　　 1、探討間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤的表達(dá)情況。
　　 2、探討間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤表達(dá)的相互關(guān)系。
　　 3、探討間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤的臨床診斷及預(yù)后評估中的價值。
　　 [內(nèi)容和方法]
　　 以1990年4月份～2010年12月份在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院經(jīng)

10、開放或腹腔鏡手術(shù)的91例典型的腎上腺腫瘤患者為研究對象，收集其術(shù)后石蠟包埋的組織標(biāo)本，結(jié)合病理報告和臨床資料證實(shí)其中腎上腺皮質(zhì)腺瘤45例、腎上腺皮質(zhì)癌14例、嗜鉻細(xì)胞瘤26例、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤瘤6例。21例正常腎上腺組織均來自于用于腎移植的尸體腎的腎上腺。以正常腎上腺為正常對照、PBS代替一抗作陰性對照，應(yīng)用免疫組織化學(xué)NovolinkTMpolymer法檢測112例標(biāo)本中Cx26、Cx32、Cx43的表達(dá)水平，每組切片均選一張行HE染色

11、，正常腎上組織均行HE染色，以排除其他病理改變。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對腎上腺腫瘤中Cx26、Cx32、Cx43的表達(dá)情況進(jìn)行處理，并分析患者性別、年齡、皮質(zhì)癌的臨床分期及患者預(yù)后與Cx26、Cx32、Cx43的關(guān)系，同時對三種間隙連接蛋白相關(guān)性進(jìn)行分析。
　　 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多分組等級資料采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩組等級資料的比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn);各因素間的相關(guān)性用Spear

12、men等級相關(guān)分析進(jìn)行。在進(jìn)行Cox模型分析前，先用Log-Rank檢驗(yàn)對單因素分析，然后將有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的單因素納入Cox成比例風(fēng)險回歸模型進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1、Cx26、Cx32、Cx43在正常腎上腺、腎上腺皮質(zhì)腺瘤、腎上腺皮質(zhì)腺癌表達(dá)的陽性強(qiáng)度均有顯著性差異(x2=21.366，P=0.000;x2=17.509，P=0.000;x2=22.645，P=0.000)，

13、Cx26、Cx32、Cx43在腎上腺皮質(zhì)腺癌的陽性表達(dá)強(qiáng)度依次低于腎上腺皮質(zhì)腺瘤和正常腎上腺。Cx26在正常腎上腺、嗜鉻細(xì)胞瘤、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤組表達(dá)的陽性強(qiáng)度有顯著性差異(x2=43.717，P=0.000)，Cx26在惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的陽性表達(dá)強(qiáng)度最高，在嗜鉻細(xì)胞瘤的表達(dá)強(qiáng)度最低。Cx32、Cx43在嗜鉻細(xì)胞瘤和惡性嗜鉻細(xì)胞瘤均呈陰性表達(dá)。
　　 2、Cx32、Cx43在腎上腺皮質(zhì)癌的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.646，P=0.013

14、)，Cx26、Cx32在腎上腺皮質(zhì)癌的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.356，P=0.212)，Cx26、Cx43在腺皮質(zhì)癌的表達(dá)呈無相關(guān)性(r=0.392，P=0.165)。Log-Rank單因素分析顯示年齡、臨床分期、Cx43的陽性表達(dá)是皮質(zhì)癌患者生存時間的影響因素。
　　 3、Cx43是影響原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)癌的預(yù)后的獨(dú)立因素(B=-1.962，P=0.030)，Cx43表達(dá)陽性的患者比表達(dá)陰性的患者預(yù)后要好。
　　 [結(jié)論]