間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤的表達及其臨床意義.pdf

1、[研究背景]
　　 隨著B超、CT、MRI等影像學技術的發(fā)展與應用及臨床診斷水平的提高，原發(fā)性腎上腺腫瘤的檢出率也明顯提高。腎上腺腫瘤(已)經(jīng)被認為是人類最常見的腫瘤之一，也越來越被臨床醫(yī)生所重視。腎上腺腫瘤往往都具有內分泌功能，腫瘤分泌的過量的腎上腺激素引起人體相應的內分泌功能的紊亂，表現(xiàn)為高血壓、庫欣綜合征、肥胖等，短期內即可引起嚴重的心血管的損害，如心肌肥厚、腦血管意外、冠心病等。大多數(shù)腎上腺的惡性腫瘤也具有內分泌功能，早

2、期具有與腎上腺良性腫瘤相似的臨床表現(xiàn)，此外，還表現(xiàn)為男性化、女性化、副瘤綜合征等。盡管大多數(shù)的腎上腺腫瘤都是良性腫瘤，但是臨床上絕不能忽視腎上腺惡性腫瘤，其對人體的危害遠遠大于良性腫瘤。腎上腺良惡性腫瘤的預后差別極大，良性腫瘤經(jīng)手術切除可以根治，而惡性腫瘤往往易于發(fā)生復發(fā)和轉移。惡性腫瘤常常表達多種耐化療藥物基因，化療效果很差，對放療也不敏感。放化療對腫瘤病人的治療和改善生存率幫助不大，目前對于腎上腺的惡性腫瘤主要治療方法是手術切除。腎

3、上腺良、惡性腫瘤早期的臨床表現(xiàn)相似、影像學上無特征性的表現(xiàn)，鑒別診斷十分困難。由于腎上腺皮質癌的組織結構與形態(tài)和腎上腺皮質腺瘤相像，常規(guī)病理也很難鑒別，有時需結合臨床表現(xiàn)、大體、鏡下組織學形態(tài)和免疫組化綜合判斷。30％～85％的腎上腺皮質癌病人診斷時已有遠處轉移，對于無功能性腎上腺皮質癌診斷時遠處轉移率更高，很多病人診斷時已失去了手術機會。相比腎上腺皮質癌，腎上腺惡性嗜鉻細胞瘤的診斷更為困難，常規(guī)病理檢查亦不能區(qū)分嗜鉻細胞瘤的良惡性，只

4、有出現(xiàn)轉移病灶才能診斷為惡性嗜鉻細胞瘤。因此，盡早鑒別良惡性腫瘤，早期診斷和治療腎上腺惡性腫瘤，對改善腫瘤患者的預后十分重要。由于在影像學上及組織學上均難以鑒別腎上腺腫瘤的良惡性，因此非常有必要從分子水平上對腎上腺腫瘤進行研究，探討其生物學行為，為臨床診斷、治療及判斷預后提供理論依據(jù)。
　　 間隙連接（gapjunction，GJ）普遍存在于脊椎動物體內，是細胞連接中的一種，由相鄰細胞膜上的間隙連接蛋白(connexinCx)構

5、成。Cx43是第一個被克隆的Cx，目前為止，研究發(fā)現(xiàn)小鼠體內有20種connexin基因，人體內有21種connexin基因，其中19對為直系同源基因。間隙連接蛋白在人體各種組織均有表達，如心臟、血管、內分泌腺、外分泌腺、肌肉、神經(jīng)組織等。但是，Cx的表達分布在不同的外界條件刺激和病理狀態(tài)下會有所改變。通過間隙連接相鄰細胞電信號的可以直接傳遞，營養(yǎng)物質、代謝產(chǎn)物、離子、第二信使、分子量小于1000道爾頓的親水性物質的也可以通過間隙連接進

6、行交換。間隙連接介導的細胞連接通訊(GapJunctionIntercellularCommunicationGJIC)對細胞的新陳代謝、內環(huán)境穩(wěn)定、增殖和分化等生理過程起著重要的調控作用。不同組織內的間隙連接具有不同的功能，其功能可分為兩個方面:GJIC非依賴型和GJIC依賴型，前者以Cx單體（未配對的Cx）在細胞內發(fā)揮作用;后者是兩個細胞或多個相鄰細胞的Cx單體耦合形成GJIC，通過GJIC發(fā)揮作用。研究證實間隙連接蛋白功能主要包括

7、以下幾個方面:①電偶聯(lián)作用:在細胞間傳遞電信號，促使動作電位的發(fā)生。②細胞通道作用:相鄰細胞間的離子、營養(yǎng)物質、液體、代謝產(chǎn)物可以迅速交換。③調控細胞的生長和分化，參與細胞的黏附和運動，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移有關。④在胚胎的生長、發(fā)育中調節(jié)細胞間信號的傳遞。Cx基因的變異與人類多種疾病有密切關系，如心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、先天性耳聾、多種皮膚疾病等。人們利用電子顯微鏡、免疫組化、蛋白印跡、PCR等多種實驗手段發(fā)現(xiàn)人類多種惡性腫瘤存在

8、著間隙連接蛋白的表達異常和間隙連接通訊功能的缺陷。通過轉染使細胞間隙連接蛋白表達及間隙連接通訊的恢復可以抑制腫瘤生長甚至逆轉惡性腫瘤，間隙連接蛋白基因表現(xiàn)出抑癌基因的特點。研究證實間隙連接蛋白(Cx)表達異常與腫瘤的增殖、侵襲、轉移有密切關系。
　　 然而，間隙連接蛋白在原發(fā)性腎上腺腫瘤的表達國內未見報道，研究腎上腺腫瘤中間隙連接蛋白的表達情況，探討其與腫瘤生物學特征的關系有助于通過間隙連接蛋白的變化來鑒別腎上腺良惡性腫瘤，有可

9、能為腎上腺惡性腫瘤的治療提供新的思路。
　　 [目的]
　　 1、探討間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤的表達情況。
　　 2、探討間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤表達的相互關系。
　　 3、探討間隙連接蛋白26、32、43在原發(fā)性腎上腺腫瘤的臨床診斷及預后評估中的價值。
　　 [內容和方法]
　　 以1990年4月份～2010年12月份在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院經(jīng)

10、開放或腹腔鏡手術的91例典型的腎上腺腫瘤患者為研究對象，收集其術后石蠟包埋的組織標本，結合病理報告和臨床資料證實其中腎上腺皮質腺瘤45例、腎上腺皮質癌14例、嗜鉻細胞瘤26例、惡性嗜鉻細胞瘤瘤6例。21例正常腎上腺組織均來自于用于腎移植的尸體腎的腎上腺。以正常腎上腺為正常對照、PBS代替一抗作陰性對照，應用免疫組織化學NovolinkTMpolymer法檢測112例標本中Cx26、Cx32、Cx43的表達水平，每組切片均選一張行HE染色

11、，正常腎上組織均行HE染色，以排除其他病理改變。運用統(tǒng)計學方法對腎上腺腫瘤中Cx26、Cx32、Cx43的表達情況進行處理，并分析患者性別、年齡、皮質癌的臨床分期及患者預后與Cx26、Cx32、Cx43的關系，同時對三種間隙連接蛋白相關性進行分析。
　　 采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。多分組等級資料采用Kruskal-WallisH檢驗，兩組等級資料的比較采用Mann-WhitneyU檢驗;各因素間的相關性用Spear

12、men等級相關分析進行。在進行Cox模型分析前，先用Log-Rank檢驗對單因素分析，然后將有統(tǒng)計學意義的單因素納入Cox成比例風險回歸模型進行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 [結果]
　　 1、Cx26、Cx32、Cx43在正常腎上腺、腎上腺皮質腺瘤、腎上腺皮質腺癌表達的陽性強度均有顯著性差異(x2=21.366，P=0.000;x2=17.509，P=0.000;x2=22.645，P=0.000)，

13、Cx26、Cx32、Cx43在腎上腺皮質腺癌的陽性表達強度依次低于腎上腺皮質腺瘤和正常腎上腺。Cx26在正常腎上腺、嗜鉻細胞瘤、惡性嗜鉻細胞瘤組表達的陽性強度有顯著性差異(x2=43.717，P=0.000)，Cx26在惡性嗜鉻細胞瘤的陽性表達強度最高，在嗜鉻細胞瘤的表達強度最低。Cx32、Cx43在嗜鉻細胞瘤和惡性嗜鉻細胞瘤均呈陰性表達。
　　 2、Cx32、Cx43在腎上腺皮質癌的表達呈正相關(r=0.646，P=0.013

14、)，Cx26、Cx32在腎上腺皮質癌的表達無相關性(r=0.356，P=0.212)，Cx26、Cx43在腺皮質癌的表達呈無相關性(r=0.392，P=0.165)。Log-Rank單因素分析顯示年齡、臨床分期、Cx43的陽性表達是皮質癌患者生存時間的影響因素。
　　 3、Cx43是影響原發(fā)性腎上腺皮質癌的預后的獨立因素(B=-1.962，P=0.030)，Cx43表達陽性的患者比表達陰性的患者預后要好。
　　 [結論]