“V(Vp)+吧+你”格式的句法、語(yǔ)義及語(yǔ)用考察_10852.pdf

1、該文對(duì)家蠶濃核病毒(Bombyx mori Densovirus,BmDNV)(鎮(zhèn)江株)的部分核苷酸序列進(jìn)行了研究,克隆并用大腸桿菌表達(dá)了主要結(jié)構(gòu)蛋白基因,試圖從分子水平、基因水平對(duì)它與山梨株的親緣關(guān)系進(jìn)行探討.一.根據(jù)已發(fā)表的日本山梨株的序列片段1(VD<,1>)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,克隆了1.5Kb的主要結(jié)構(gòu)蛋白基因(vp),測(cè)序并用Dna-Star軟件分析了兩者的同源性.該片段與山梨株VD1-ORF2的同源性為98.1﹪,有29處核苷酸

2、發(fā)生了突變;推測(cè)的氨基酸序列與山梨株的同源性為98.6﹪,有7個(gè)氨基酸發(fā)生了替換.該序列已經(jīng)在GeneBank登錄,登錄號(hào)為AY236978二.根據(jù)已發(fā)表的日本山梨株的序列片段2(VD<,2>)在兩個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORFs)之間設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,擴(kuò)增得到了992bp位于兩個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORFs)之間的一個(gè)片段,測(cè)序并用Dna-Star軟件分析了兩者的同源性.該片段與BmDNV山梨株相戍部分的同源性為98.5﹪.位于兩個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORFs)

3、之間的序列有缺失或插入突變.三.在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中用Blast軟件在線檢索,除家蠶濃核病毒山梨株DNA外,未發(fā)現(xiàn)其他同源序列.四.將病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白基因(vp)插入到表達(dá)質(zhì)粒pET-28a多克隆位點(diǎn)BamH I與EcoRI之間,使其位于誘導(dǎo)型啟動(dòng)子LacZ之后,轉(zhuǎn)化到BL2l(DE3)菌株,進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá).表達(dá)產(chǎn)物在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中呈現(xiàn)特異的條帶,大小約為53KD,與預(yù)計(jì)的大小大致相近.用Western-blotting檢