配伍對白芍中芍藥苷煎出量的影響及對大鼠乳腺增生病作用的實驗研究.pdf

1、白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactifora Pall.的干燥根,味辛、酸,微寒,歸肝、脾經(jīng)。白芍具有平肝止痛,養(yǎng)血調(diào)經(jīng),斂陰止汗的功效。臨床用于治療頭痛眩暈,脅痛,腹痛,四肢攣痛,血虛萎黃,月經(jīng)不調(diào),自汗,盜汗等?，F(xiàn)代藥理研究表明,白芍有效成分芍藥苷具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、解痙解熱及免疫調(diào)節(jié)等作用。
　　 中藥配伍應用是中醫(yī)治療疾病的主要形式。中藥通過配伍不僅能增強治療效果,擴大治療范圍,適應復雜病情,且可減少不良反應,防止藥

2、物中毒?！秱摗分杏涊d白芍配柴胡,二藥合用,疏肝之中斂肝,升陽之中斂陰,補肝體而和肝用,使肝氣得疏,肝血得補,疏柔相濟,動靜結(jié)合,以發(fā)揮肝藏血、主疏泄之功能,可治療情志不遂、肝氣郁結(jié)所致情緒抑郁或急躁易怒、胸脅苦滿、兩脅及乳房脹痛、月經(jīng)不調(diào)等。白芍通過與常用肝經(jīng)藥物柴胡、當歸、玫瑰花等配伍,可廣泛用于多種疾病的治療。據(jù)文獻考證國內(nèi)外學者研究發(fā)現(xiàn),其臨床作用皆與白芍中所含的活性成分——芍藥苷有關。
　　 乳腺增生病(HMG)是中

3、青年婦女的常見病、多發(fā)病,屬于中醫(yī)“乳癖”范疇。中醫(yī)認為本病根源乃肝氣郁結(jié)所致,其發(fā)生與肝、脾、胃的經(jīng)脈及沖任二脈有密切的關系,尤其與肝經(jīng)有密切關系,大多與肝郁有關,多采用“木郁達之”治法,其療效確切。目前由于生活節(jié)奏的加快,工作壓力加大,因而臨床上肝郁氣滯型乳腺增生病見之最多。
　　 故本實驗以芍藥苷作為研究的重要指標,主要觀察其與常用肝經(jīng)藥物柴胡、當歸、玫瑰花等配伍后對其主要成分芍藥苷煎出量的影響,以揭示中藥配伍形式的內(nèi)涵,

4、為臨床配伍應用提供科學依據(jù)。但芍藥苷的含量與臨床白芍的配伍其柔肝、養(yǎng)血、止痛作用是否存在正相關性尚未見報道,故進一步做動物實驗研究。
　　 動物實驗結(jié)合中醫(yī)對乳腺增生病的病因病機認識,采用束縛制動加連續(xù)、不定時強迫游泳方法復制肝郁氣滯型乳腺增生病的動物模型,并選用具有養(yǎng)血柔肝止痛作用的白芍作為主藥,通過與柴胡、或當歸、或玫瑰花的配伍對大鼠乳腺增生病的治療作用機制進行研究,進一步探索芍藥苷與白芍配伍養(yǎng)血、柔肝、止痛作用的相關性,為

5、今后臨床配伍應用提供科學數(shù)據(jù)。
　　 第一部分柴胡、當歸、玫瑰花對白芍中芍藥苷煎出量的影響研究
　　 本實驗分別采用薄層色譜法(TLC)定性鑒別和高效液相色譜法(HPLC)定量測定單味白芍及白芍與柴胡、當歸、玫瑰花配伍后,其芍藥苷的含量變化,從而考察傳統(tǒng)配伍的科學性。
　　 目的:研究配伍柴胡、或當歸、或玫瑰花對白芍中芍藥苷煎出量的影響。
　　 方法:(1)鑒別方法的研究:采用薄層色譜法,選用合適的提取溶

6、劑和方法,以氯仿:甲醇(4:1)為展開劑,5％香草醛硫酸溶液為顯色劑,芍藥苷標準品作為對照品,對白芍水煎液及白芍配柴胡、白芍配當歸、白芍配玫瑰花水煎液中的芍藥苷進行定性鑒別分析。(2)芍藥苷的含量測定:①色譜條件:選擇合適的固定相,調(diào)整流動相的組成、配比、流速以使芍藥苷色譜峰與其它峰完全分離。②標準曲線的繪制:配制系列濃度的芍藥苷對照品溶液,分別進樣,按含量測定方法測定峰面積,以芍藥苷對照品進樣量為橫坐標,相應峰面積為縱坐標,繪制標準曲

7、線。③精密度試驗:精密量取芍藥苷對照品溶液,重復進樣5次,在色譜條件下測定峰面積。④穩(wěn)定性試驗:精密量取同一份供試品溶液,在48小時內(nèi)于不同時間注入高效液相色譜儀,分別測定峰面積。⑤重復性試驗:精密量取同一份供試品溶液,平行進樣5次,分別測定峰面積。⑥回收率試驗:采用加樣回收率測定法,取已知含量的樣品溶液適量,每組分別加入適量的芍藥苷對照品,對所得樣品分別進樣,在上述色譜條件下測定峰面積,計算回收率。⑦樣品含量測定:分別精密量取供試品溶

8、液,在上述色譜條件下測定峰面積,計算其中的芍藥苷含量。
　　 結(jié)果:(1)鑒別方法的研究:采用相應的薄層鑒別方法,供試品溶液與對照品溶液在相應位置顯相同顏色的斑點,斑點清晰,陰性對照無干擾。(2)芍藥苷的含量測定:①色譜條件:色譜柱為Diamonsic C18柱(200×4.6 mm,5μm);流動相:甲醇—水(40:60);檢測波長:230nm;流速:1.0ml/min;柱溫:25℃;進樣量:10μl;在此色譜條件下,芍藥苷保

9、留時間約為8min,分離度大于1.5,理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算,應不低于2000。②標準曲線的繪制:芍藥苷在0.0974～0.5846μg范圍內(nèi)線性關系良好,回歸方程為y=1452.3x+12.614(R2=0.9998,n=5)。③精密度試驗:儀器的精密度良好,RSD值為0.24％(n=5)。④穩(wěn)定性試驗:樣品在48小時內(nèi)穩(wěn)定,RSD值為0.43％(n=6)。⑤重復性試驗:本方法重現(xiàn)性良好,RSD值為0.15％(n=5)。⑥回收率試驗

10、:芍藥苷的平均回收率為99.55％,RSD值為0.56％(n=9),表明回收率較高,方法準確可靠。⑦樣品含量測定:白芍與柴胡等份煎煮液中芍藥苷煎出量為29mg/g,與單味藥白芍(19.8mg/g)相比明顯提高46％以上;白芍與當歸等份煎煮液中芍藥苷煎出量為24.6mg/g,較單味藥白芍明顯提高21％;白芍與玫瑰花等份煎煮液中芍藥苷煎出量為33.4mg/g,與單味藥白芍比較明顯提高69％;白芍與柴胡、當歸、玫瑰花等份煎煮液中芍藥苷煎出量為

11、32.0mg/g,與單味藥白芍相比明顯提高62％;表明白芍配伍柴胡、當歸、玫瑰花后芍藥苷煎出量較單味白芍顯著提高。
　　 結(jié)論:薄層色譜法操作簡便、快速、準確,適用于芍藥苷的定性鑒別;高效液相色譜(HPLC)法所建立的方法準確度和精密度良好,芍藥苷含量測定結(jié)果表明常用藥物柴胡、當歸、玫瑰花與白芍配伍后均能明顯提高其芍藥苷的煎出量。
　　 第二部分不同藥物配伍白芍對大鼠乳腺增生病作用機制的實驗研究
　　 本實驗采用

12、束縛制動加連續(xù)、不定時強迫游泳方法復制肝郁氣滯型乳腺增生病的動物模型,并結(jié)合中醫(yī)對本病的病因病機、常用藥物特點和現(xiàn)代醫(yī)學的生理病理變化認識等,選用具有養(yǎng)血柔肝止痛作用的白芍作為主藥,通過與柴胡、或當歸、或玫瑰花的配伍進行實驗觀察,來進一步探討配伍對白芍養(yǎng)血柔肝止痛作用的影響,以便更好的揭示配伍對中藥原有作用與其有效成分的相關性。
　　 目的:探討白芍與常用藥物(柴胡、當歸、玫瑰花)配伍對大鼠乳腺增生病的治療作用機制。
　　

13、 方法:本實驗采用束縛制動加連續(xù)、不定時強迫游泳方法復制肝郁氣滯型乳腺增生病的動物模型。將大鼠放入自制網(wǎng)狀紗袋中后,置于25℃水中強迫游泳5～10min,1次/d,不定時、間斷進行30d,共計25次,復制肝郁氣滯型乳腺增生大鼠模型。實驗大鼠第2、3對乳頭直徑與正常對照組相比明顯增大(P＜0.05或P＜0.01),模型制作成功。造模成功后將大鼠隨機分為A(空白)組、B(模型)組、C(治療)組,包括C1(白芍)組、C2(白芍+柴胡)組、C

14、3(白芍+當歸)組、C4(白芍+玫瑰花)組和C5(白芍+柴胡+當歸+玫瑰花)組。除空白組、模型組灌胃給予相應量生理鹽水外,其治療各組大鼠均灌胃給相應藥物,每日用藥劑量為16g/kg(相當于成人劑量的10倍),各組1次/d,連續(xù)30d。實驗期間大鼠均自由飲水和給予普通飼料飼養(yǎng)。30d后將大鼠斷頭取血,測定血清中生殖激素六項水平,用游標卡尺測量大鼠第2、3對乳頭根部直徑,再取下第3對完整的乳房組織,用4％的多聚甲醛固定,石蠟包埋,HE染色,