還原性β2GPⅠ對糖尿病心血管MMPs和TIMPs的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:1.研究還原型β2GPⅠ對糖尿病小鼠心臟和主動(dòng)脈 MMP2，MMP9，TIMP-1,TIMP-2的影響及相關(guān)機(jī)制。2.回顧性分析還原型β2GPⅠ與糖尿病/冠心病的相關(guān)性及其對冠心病的診斷預(yù)測。
　　方法：1.雌性8周齡Balb/c小鼠64只，隨機(jī)抽取16只小鼠作為正常對照組，給予常規(guī)飼料8周。其余48只小鼠給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)8周。然后腹腔注射2％STZ，80mg/kg,連續(xù)注射2次,一周后測血糖,大于16.7 mmol/L

2、為制備成糖尿病模型。隨機(jī)分為6組（每組8只），單劑量組3組（尾靜脈注射一次）：β2GPⅠ組（20μg/1ml PBS），還原型β2GPⅠ組（20μg/1ml PBS），糖尿病對照組（1ml PBS），喂養(yǎng)3周；復(fù)劑量組3組（尾靜脈注射兩次，分別在第1天和第22天）：β2GPⅠ組（20μg/1ml PBS/次），還原型β2GPⅠ組（20μg/1ml PBS/次），糖尿病對照組（1ml PBS），喂養(yǎng)6周。正常對照組隨機(jī)分為2組（每組8只）

3、，分別作為單劑量和復(fù)劑量組的正常對照組（同期給予等量 PBS）。成模后每周測體重、血糖，分別在3周末和6周末取血測血脂，取材主動(dòng)脈及心臟，一部分用于蘇丹Ⅳ染色觀察脂質(zhì)沉積和HE染色及TIMP-1免疫組化染色，觀察鏡下結(jié)構(gòu)，另一部分用于明膠酶譜檢測MMP2、MMP9酶活性，Western blot和real time PCR檢測MMP2、MMP9、TIMP-1、TIMP-2蛋白和mRNA的表達(dá)，同時(shí)研究p38MAPK信號(hào)通路的變化。2.收

4、集天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院住院糖尿病患者200例，同時(shí)收集天津市胸科醫(yī)院冠心病患者100例，正常對照組40例。留取血清測β2GPⅠ，還原型β2GPⅠ。根據(jù)病歷登記患者一般情況（年齡、性別）、糖尿病病程、HbA1c、血脂、心血管事件，射血分?jǐn)?shù)，左室末舒張容積、冠脈造影、糖尿病家族史、高血壓家族史，心血管家族史，分析β2GPⅠ/還原型β2GPⅠ與上述指標(biāo)的相關(guān)性。并試圖確定冠心病診斷的最佳臨界值。
　　結(jié)果：1.各組間體重?zé)o差異（P>0

5、.05)，糖尿病小鼠血糖顯著高于正常對照組（P<0.05)。還原型β2GPⅠ組與糖尿病對照組相比，降低LDL-c水平（P<0.05）。還原型β2GPⅠ組主動(dòng)脈脂質(zhì)沉積明顯少于糖尿病對照組（P<0.05）。復(fù)劑量時(shí)糖尿病組主動(dòng)脈出現(xiàn)了脂質(zhì)斑塊而還原型β2GPⅠ組血管壁結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮無增厚，未見明顯泡沫細(xì)胞形成。在主動(dòng)脈，糖尿病組MMP2和MMP9酶活性最強(qiáng)，還原性β2GPⅠ組酶活性得到抑制，尤其是復(fù)劑量組。還原型β2GPⅠ下調(diào)MMP2，M

6、MP9，TIMP-1，TIMP-2 mRNA表達(dá)及MMP2、TIMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)，使MMP2/TIMP2和MMP9/TIMP1 mRNA和MMP2/TIMP-2蛋白低于糖尿病對照組還原性（P<0.05）。還原型β2GPⅠ與糖尿病對照組相比，下調(diào)p38MAPKmRNA表達(dá)（P<0.05）,磷酸化p38MAPK在復(fù)劑量時(shí)低于糖尿病對照組（P<0.05)。β2GPⅠ與糖尿病對照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在心臟，糖尿病

7、組MMP2和MMP9酶活性最強(qiáng)，還原性β2GPⅠ組酶活性得到抑制，尤其是復(fù)劑量組。TIMP-1和TIMP-2 mRNA和蛋白在復(fù)劑量時(shí)還原型β2GPⅠ組表達(dá)最多（P<0.05），MMP2/TIMP2和MMP9/TIMP1 mRNA和MMP2/TIMP2蛋白表達(dá)最低（P<0.05）。還原型β2GPⅠ與糖尿病對照組相比上調(diào)p38MAPK mRNA表達(dá)及增加磷酸化p38MAPK蛋白水平（P<0.05），β2GPⅠ僅復(fù)劑量時(shí)mRNA表達(dá)高于糖尿

8、病對照組（P<0.05），但是其磷酸化p38 MAPK蛋白水平與糖尿病對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。2.糖尿病組，冠心病組，糖尿病合并冠心病組及正常對照組相比，其β2GPⅠ組間有差異（P<0.05），還原型β2GPⅠ組間有差異（P<0.05）。β2GPⅠ在單純糖尿病和糖尿病合并冠心病組高于單純冠心病和正常對照組（P<0.05）。然而，還原型β2GPⅠ在單純糖尿病組低于正常對照組（P<0.05），還原型β2GPⅠ在單純冠心病組高

9、于正常對照組（P<0.05），糖尿病合并冠心病時(shí)，還原型β2GPⅠ低于單純冠心病組（P<0.05），高于單純糖尿病組P<0.05）。進(jìn)行相關(guān)分析，在糖尿病患者中，還原型β2GPⅠ與冠心病相關(guān)(r=0.453，P=0.001）。糖尿病合并冠心病患者中，還原型β2GPⅠ與SBP相關(guān)(r=0.458，P=0.007)，與DBP相關(guān)(r=0.381，P=0.029)，與Hb相關(guān)(r=0.453，P=0.008)，與TG相關(guān)(r=0.337，P=

10、0.030),與TC相關(guān)(r=0.511，P=0.022),與LDL-c相關(guān)(r=0.468，P=0.006),與BMI相關(guān)(r=0.345，P=0.049)。還原型β2GPⅠ作為冠心病的診斷性指標(biāo)，當(dāng)切點(diǎn)為9.52mg/L,其陽性似然比為9.51，預(yù)測冠心病發(fā)生率高。
　　結(jié)論：還原性β2GPⅠ通過降低MMPs/TIMPs起到心血管保護(hù)作用，其機(jī)制是通過調(diào)節(jié)p38MAPK信號(hào)通路來調(diào)節(jié)MMPs和TIMPs系統(tǒng)，抑制血管脂質(zhì)沉積，