羅格列酮對(duì)糖尿病心血管疾病保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的: 觀察羅格列酮對(duì)高糖及C反應(yīng)蛋白(CRP)環(huán)境中培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HVECs)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)及血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA和蛋白表達(dá)的影響，探討羅格列酮(RSG)在糖尿病患者抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用及機(jī)制。 方法: 1.體外培養(yǎng)HUVECs，傳至5代，分成6組，分別培養(yǎng)于含有不同濃度RSG(0.1，0.5，1，5，10，20μmol/L)的DMEM培養(yǎng)液中，24h后采用MTT法

2、檢測(cè)不同組細(xì)胞活性的改變。 2.重新體外培養(yǎng)細(xì)胞，傳至5代，分成4組，正常對(duì)照組(NG)、高糖組(HG)、高糖+CRP組(HC)、CRP組(CRP)，培養(yǎng)24h后，每組隨機(jī)分出一半細(xì)胞，收集凍存?zhèn)溆?。余下?xì)胞培養(yǎng)于含有RSG培養(yǎng)基中24h，收集細(xì)胞。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同組RSG干預(yù)前后HUVECs的凋亡率的變化：采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)不同組間及干預(yù)前后細(xì)胞中MCP-1、VCAM-1 mRNA表達(dá)水平的變

3、化；采用Western blot方法檢測(cè)不同組間干預(yù)前后細(xì)胞中MCP-1、VCAM-1蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果: (1)MTT法檢測(cè)HUVECs的活性：HUVECs分別培養(yǎng)于含有不同濃度RSG的培養(yǎng)基中，當(dāng)RSG濃度為5μmol/L，細(xì)胞活性顯著高于其他組(P<0.05)。 (2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVECs凋亡率：HG組、HC組、CRP組HUVECs凋亡率較NG組顯著升高(P<0.01)，RSG干預(yù)后三組細(xì)胞凋

4、亡率分別較干預(yù)前顯著降低(P<0.05)。 (3)RT-PCR法檢測(cè)HUVECsMCP-1、VCAM-1mRNA水平：HG組、HC組、CRP組HUVECs的MCP-1、VCAM-1的mRNA水平較NG組升高(P<0.01)；RSG干預(yù)后各組分別較干預(yù)前MCP-1、VCAM-1的mRNA水平明顯降低(P<0.01)。 (4)Western blot法檢測(cè)HUVECsMCP-1、VCAM-1蛋白水平：HG組、HC組、CRP組