大鼠肝缺血再灌注損傷中Hsp70與PARP蛋白協(xié)同作用的研究.pdf

1、目的：通過熱應激建立 Hsp70高表達模型，探討高表達的Hsp70在大鼠肝缺血再灌注損傷中對肝細胞的保護作用及與DNA保護蛋白PARP蛋白相關(guān)關(guān)系。
　　方法：購買健康SD雄鼠35只，隨機分為5組，分別為H-/P+、H+/P-、H+/P+、PC、NC組。通過熱應激刺激熱休克蛋白（Hsp70）的高表達，槲皮素抑制Hsp70表達，3-氨基苯甲酰胺（3-AB：3-aminobenzamide）抑制 PARP-1自由表達，PC（Posit

2、ive control group，陽性對照組）單純行肝缺血再灌注，NC（Negative control group，陰性對照組）單純手術(shù)開腹不行肝血管夾閉。Pringle’s法建立SD雄性大鼠肝缺血再灌注模型，取血液學標本檢測 ALT了解肝功能受損情況；取肝臟組織標本作 HE染色觀察肝組織形態(tài)學變化，免疫組化檢測標本組織中的Hsp70和PARP-1的表達和定位；Western blot（WB）檢測Hsp70的表達，TUNEL法檢測肝

3、細胞凋亡，用專業(yè)圖像分析軟件對免疫組化及 WB結(jié)果進行分析，用SPSS16.0對所測的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色：光鏡下可見PC組（陽性對照組）肝細胞腫脹明顯，肝細胞索及肝竇界線不清，肝竇狹窄，肝小葉中央靜脈、肝竇淤血，匯管區(qū)可見中性粒細胞浸潤；NC組肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，小葉中央靜脈、肝細胞索及肝竇結(jié)構(gòu)清晰，匯管區(qū)未見明顯炎性細胞浸潤，肝竇未見明顯淤血，H+/P+介于兩者之間。
　　2.血清ALT

4、檢測：PC組與H-/P+、H+/P-、H+/P+、NC組比較有顯著性差異,高于其他組，P<0.01；H+/P+較 PC、H-/P+、H+/P-低，P<0.01；H+/P-同 H-/P+比較有統(tǒng)計學差異，H+/P-低于H-/P+，P<0.01。
　　3.Hsp70免疫組化染色：染色信號主要位于細胞漿，少量出現(xiàn)在細胞核中，棕黃色為陽性標記細胞，陽性細胞主要分散于小葉靜脈周圍。H+/P+、H+/P-組無顯著性差異，H-/P+組低于前兩組

5、Hsp70的表達，表示造模成功。
　　4.PARP-1免疫組化染色：棕黃色顆粒主要位于細胞核，染色細胞分散在中央靜脈周圍，統(tǒng)計分析顯示H+/P-組與H+/P+、H-/P+、PC、NC組比較，PARP-1表達有顯著性差異, H+/P+,H-/P+組PARP-1的表達無顯著性差異，造模成功。
　　5.WB檢測：WB印證了免疫組化所測的結(jié)果，更進一步明確Hsp70的表達情況。統(tǒng)計分析示H+/P-組與H+/P+組比較無顯著性差異；H

6、-/P+組與PC組比較無顯著性差異,兩者皆P>0.05；H+/P-組及H+/P+組分別與其他組比較，都有顯著性差異，較其他組表達明顯增多，P<0.01；NC組與其他四組比較有顯著性差異，明顯較其他四組低，P<0.01,熱應激促進Hsp70的高表達，槲皮素達到了抑制熱應激誘導Hsp70過表達的效果。
　　6.TUNEL染色：光鏡下顯示凋亡細胞主要位于中央靜脈周圍，細胞核致密深染成棕黃色，統(tǒng)計學顯示凋亡陽性細胞數(shù)計數(shù) H+/P-組較

7、H-/P+組明顯減少，P<0.05；H+/P+較 H-/P+、H+/P-及 PC組明顯減少，有統(tǒng)計學意義，P<0.01。PC組較其它幾組比較凋亡細胞最多，P<0.01，有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1.結(jié)果表明Hsp70減少HIRI中肝細胞凋亡，減輕肝功能的損害；
　　2.PARP-1可減少HIRI所致的肝細胞凋亡，發(fā)揮肝細胞保護作用；
　　3.HIRI中當細胞中PARP-1蛋白存在時更有利于Hsp70發(fā)揮細胞