HSP70入核與PARP-1結合在肝缺血再灌注損傷中的保護作用.pdf

1、目的:
　　通過建立大鼠熱休克及肝臟缺血再灌注模型，研究 HSP70進入細胞核與PARP-1結合，在大鼠肝臟缺血再灌注損傷中的保護作用。
　　方法:
　　選擇健康的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠，體重在180g-250g之間，隨機分為5組：HSP70抑制組（H-/P+組），通過槲皮素抑制HSP70的高表達；陰性對照組（NC組）；熱休克組（H+/P+組），通過熱休克促進HSP70的高表達；陽性對照組（PC組

2、）即肝臟缺血再灌注組，Pringle法建立肝臟缺血再灌注模型；PARP-1抑制組（H+/P-組），通過3-AB抑制PARP-1的表達。各組造模成功后取肝臟組織及血液樣本，分析各組大鼠血生化指標改變，Western blot分析HSP70與PARP-1的表達情況，免疫共沉淀分析HSP70與PARP-1的結合情況，肝臟標本HE染色觀察組織形態(tài)學改變。結果采用專業(yè)圖像分析軟件進行分析，用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果:

3、r>　　1.用自動生化儀檢測血清學標本，統(tǒng)計軟件分析結果示各個組相互比較均有顯著性差異，P<0.01，有統(tǒng)計學意義。PC組血清 ALT值最高，與其余各組比較有顯著性差異，P<0.01；H+/P+組與H-/P+組、H+/P-組比較有顯著性差異，P<0.01，血清ALT值較低；H-/P+組與H+/P-組比較血清ALT值高，有顯著性差異，P<0.01；表明細胞核中HSP70與PARP-1均可發(fā)揮肝功能保護作用，HSP70對肝功能的保護作用強于

4、PARP-1。
　　2.通過提取細胞核中HSP70行Westren blot檢測，證實HSP70進入細胞核中，且明確了各處理組中 HSP70的表達情況。統(tǒng)計分析示：H+/P+組與H+/P-組比較無顯著性差異，P>0.05；H-/P+組與PC組比較無顯著性差異，P>0.05；H+/P+組、H+/P-組與其他組比較，Hsp70的表達增高，有顯著性差異，P<0.01；NC組與其余組比較均有顯著性差異，P<0.01，只有少量Hsp70的表

5、達；表明熱應激、缺血再灌注損傷均可促進HSP70表達，槲皮素起到了抑制HSP70的表達。
　　3.提取細胞核中PARP-1行Westren blot檢測，統(tǒng)計分析各組PARP-1表達情況：H+/P+與其余組比較有顯著性差異，P<0.01，表達明顯增多；H-/P+組與PC組、NC組及H+/P-比較有顯著性差異，P<0.01，PARP-1表達增多；H+/P-組與PC組、NC組比較PARP-1表達量多，有顯著性差異，P<0.01；PC組

6、與NC組比較有顯著性差異，P<0.01；表明熱休克及缺血再灌注損傷均促使細胞核PARP-1的表達，3-AB達到了抑制PARP-1的過表達。
　　4.免疫共沉淀檢測：提取各組大鼠肝臟細胞核蛋白，分別用PARP-1、HSP70抗體免疫沉淀，再行Western blot分析，結果示：在70kDa和29kDa處各出現(xiàn)一條帶，為HSP70和PARP-1蛋白，證實了細胞核中HSP70與PARP-1復合物的存在。表明了在熱休克及缺血再灌注損傷等

7、應激時，HSP70進入細胞核中與PARP-1結合。
　　5.HE染色結果顯示：NC組（空白對照組）肝小葉結構基本正常，肝小葉中央靜脈、肝竇結構清晰可見，匯管區(qū)無明顯的中性粒細胞浸潤，肝竇無明顯淤血；PC組（缺血再灌注組）肝細胞明顯腫脹，肝竇狹窄、淤血，肝小葉中央靜脈淤血，肝細胞索及肝竇分界不清，匯管區(qū)見中性粒細胞浸潤；H-/P+組（HSP70抑制組）、H+/P-組（PARP-1抑制組）及H+/P+（熱休克組）肝細胞損傷病理改變介于