COBE 2991細(xì)胞處理器純化人胰島的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:1、建立合適的用于純化人胰島的密度梯度液的配制方法；2、使用COBE2991細(xì)胞處理器比較不連續(xù)密度梯度純化法和連續(xù)密度梯度純化法純化胰島的效果；3、制定出適合本實(shí)驗(yàn)胰島分離方案的純化程序。 材料和方法:從符合胰島移植要求的腦死亡尸體中獲取胰腺，保存在冷UW器官保存液內(nèi)，再運(yùn)送到胰島分離純化實(shí)驗(yàn)室，熱缺血時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，冷缺血時(shí)間控制在8小時(shí)內(nèi)；剪去胰腺附著組織，胰管內(nèi)插管灌注冷膠原酶，待胰腺膨脹后再次修剪胰腺；在消

2、化循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)消化，得到的消化產(chǎn)物孵育后使用COBE2991細(xì)胞處理器分別采用連續(xù)密度梯度法和不連續(xù)密度梯度法進(jìn)行離心純化。并對(duì)得到的胰島檢測數(shù)量、純度，換算為胰島當(dāng)量(IEQ，isletequivalents)，計(jì)算胰島回收率，比較用兩種方法所獲得的胰島質(zhì)量，選擇純化效果佳的方法，制定出使用COBE2991細(xì)胞處理器純化人胰島的操作程序。 結(jié)果與討論:不連續(xù)密度梯度組10例，連續(xù)密度梯度組8例，兩組的胰腺質(zhì)量及修剪、灌注后的質(zhì)量

3、無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，消化產(chǎn)物的胰島數(shù)量(各不同直徑的胰島數(shù)量及總IEQ)兩組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。比較純化后胰島產(chǎn)量、純度和胰島回收率，連續(xù)密度梯度法優(yōu)于不連續(xù)密度梯度法(P＜0.05)，連續(xù)密度梯度法收集的大體積(直徑大于200微米)胰島明顯多于不連續(xù)密度梯度法(P＜0.01)，胰島經(jīng)1～2天培養(yǎng)后外分泌組織萎縮、死亡，純度明顯提高?！　∮捎谖覀兊墓嘧ⅰ⒎蛛x設(shè)備及技術(shù)不完全同于國外，而且灌注、分離操作條件及程序處于實(shí)驗(yàn)、改進(jìn)狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)的