癲癇患兒外周血中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及意義.pdf

1、目的：
　　 癲癇(EP)是由多種病因引起的臨床常見(jiàn)疾病,隨著神經(jīng)解剖、電生理生化及遺傳等學(xué)科的發(fā)展,越來(lái)越多的人認(rèn)為自身免疫機(jī)制可能在癲癇發(fā)病中起到一定作用。調(diào)節(jié)性T(Treg)細(xì)胞是抑制性T細(xì)胞的一種功能亞群,通過(guò)抑制其他免疫效應(yīng)細(xì)胞的功能發(fā)揮免疫抑制活性,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng),它與白細(xì)胞介素-2(IL-2)關(guān)系非常密切。癲癇患兒體內(nèi)存在IL-2濃度的異常,推測(cè)癲癇患兒外周血中Treg細(xì)胞也可能存在異常。本文研究CD4+CD25

2、+Foxp3+Treg細(xì)胞在癲癇患兒外周血中的表達(dá)水平,探討其在癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 材料和方法：
　　 一研究對(duì)象
　　 (一)實(shí)驗(yàn)組
　　 2010年3月至2010年12月在我院小兒神經(jīng)內(nèi)科病房住院或門(mén)診就診的患兒。根據(jù)入選標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)入選的患兒共41例,分兩組:A組(年齡＞1歲)29例,其中男16例,女13例,平均5.59±2.61歲;B組(年齡1月～1歲)12例,其中男8例,女4例,平均

3、0.39±0.19歲。根據(jù)1989年國(guó)際抗癲癇聯(lián)盟(ILAE)制定的癲癇發(fā)作的分類(lèi)方案,全部病例均為強(qiáng)直-陣攣發(fā)作。
　　 (二)正常對(duì)照組
　　 同期門(mén)診體檢的健康兒童38例,分兩組:C組(年齡＞1歲)30例,其中男20例,女10例,年齡3.54±2.65歲;D組(年齡1月～1歲)8例,其中男4例,女4例,年齡0.48±0.38歲。癲癇組與對(duì)照組問(wèn)性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 二、標(biāo)本采集
　　 癲癇

4、組患兒于入院24小時(shí)內(nèi)取空腹靜脈血2ml,對(duì)照組健康兒童取空腹靜脈血2ml,經(jīng)肝素抗凝后待用。
　　 三、主要儀器和試劑
　　 FACSCalibur流式細(xì)胞儀、高溫低速離心機(jī)、震蕩儀、加樣槍、超凈工作臺(tái);人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞染色試劑盒(eBioscience公司)、溶血素、淋巴細(xì)胞分離液。
　　 四、方法
　　 (一)Treg細(xì)胞比例的測(cè)定
　　 (1)外周血單核細(xì)胞(PBMCs)的提取
　　

5、 (2)T調(diào)節(jié)細(xì)胞的染色
　　 (3)上流式細(xì)胞儀分析
　　 (二)淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白的測(cè)定
　　 按照說(shuō)明書(shū),用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定淋巴細(xì)胞亞群,用免疫速率散射比濁法測(cè)定免疫球蛋白。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、與對(duì)照組相比,年齡＞1歲的癲癇組外周血中Treg細(xì)胞比例、CD4+T細(xì)胞比例、CD4+/CD8+比值、免疫球蛋白A濃度顯著降低,CD8+T細(xì)胞比例、自然殺傷(NK)細(xì)胞比例、B淋巴細(xì)胞比

6、例顯著升高。
　　 2、與對(duì)照組相比,年齡1月～1歲的癲癇組外周血中Treg細(xì)胞比例、CD4+/CD8+比值、免疫球蛋白A濃度顯著降低,CD8+T細(xì)胞比例升高。
　　 3、1月～1歲組患兒外周血中免疫球蛋白A濃度、免疫球蛋白G濃度較＞1歲組顯著降低,其余免疫指標(biāo)兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、癲癇患兒外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例顯著降低,免疫抑制活性減弱,使C