熱應(yīng)激及運(yùn)動(dòng)對大鼠CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景:中暑(Heat illness)是發(fā)生在高溫高濕環(huán)境下的急性熱致疾病，熱射?。℉eat stroke，HS）為中暑最嚴(yán)重的類型，死亡率高達(dá)50％[1，2]。臨床上又分為經(jīng)典型熱射病(classic heat stroke，CHS)和勞力性熱射病(exertional heatstroke，EHS)。熱射病的臨床表現(xiàn)及病理生理機(jī)制與膿毒癥十分相似[3]，但其炎癥反應(yīng)較膿毒癥相比更為嚴(yán)重[4]。在膿毒癥致病機(jī)制中，全身炎癥反應(yīng)綜合

2、征和代償性抗炎反應(yīng)綜合征幾乎同時(shí)發(fā)生，產(chǎn)生多種抑制免疫反應(yīng)細(xì)胞因子造成免疫麻痹，發(fā)生嚴(yán)重的全身感染并導(dǎo)致患者死亡。其中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(RegulatoryT Cells，Tregs)是關(guān)鍵的細(xì)胞之一[5，6]，多個(gè)研究證實(shí)，Tregs的比例是膿毒癥早期診斷[7]及預(yù)后判斷[8]的重要指標(biāo)。目前國內(nèi)外均無Tregs在熱射病發(fā)病機(jī)制中的作用研究，因此我們借鑒膿毒癥免疫紊亂方面的研究方法來探索熱射病的免疫系統(tǒng)的變化
　　目的:通過構(gòu)建CH

3、S與EHS大鼠模型，檢測造模后不同時(shí)間點(diǎn)血清炎癥因子變化情況、脾臟和外周血中CD4+CD25+Foxp3+ Tregs的水平及Tregs在脾臟中的凋亡情況，以了解熱射病大鼠發(fā)病早期的免疫狀態(tài)及其可能的原因。
　　方法:140只成年雄性大鼠按完全隨機(jī)分組方法將其分為3組:正常對照組（N-Control組）(n=20)、經(jīng)典型熱射病模型組（CHS組）(n=60)、勞力性熱射病模型組（EHS組）(n=60)。N-Control組不做任何

4、處理;CHS組大鼠麻醉后置于高溫高濕環(huán)境中;EHS組大鼠置于高溫高濕環(huán)境中行跑臺訓(xùn)練。CHS組和EHS組按照造模成功后取樣時(shí)間點(diǎn)分為6個(gè)亞組(0h、6h、12h、24h、48h、72h)，每亞組10只大鼠。各亞組大鼠于預(yù)定時(shí)間點(diǎn)經(jīng)右側(cè)頸動(dòng)脈置管留取新鮮動(dòng)脈血，分別置于肝素抗凝EP管及生化管中，開腹取脾臟。全自動(dòng)生化檢測儀檢測血生化指標(biāo)(AST、ALT、CK、Cr);ELISA方法檢測血中TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10、TGF

5、-β水平。流式細(xì)胞血技術(shù)檢測各亞組外周血及脾臟中Tregs的比例及脾臟Tregs的凋亡率。
　　結(jié)果:1、通過檢測各組大鼠造模后6h時(shí)間點(diǎn)AST、ALT、CK、Cr水平，CHS組與N-Control組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，EHS組與CHS組、N-Control組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，驗(yàn)證造模成功。CHS組大鼠發(fā)病早期血清TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10水平均迅速升高，在12h或24h達(dá)到高峰之后開始緩慢降低;血清TG

6、F-β水平呈逐漸升高趨勢，五種細(xì)胞因子在所有時(shí)間點(diǎn)均明顯高于N-Control組。EHS組大鼠發(fā)病早期血清TNF-α、IL-2、IL-6、IL-10、TGF-β的變化趨勢與CHS組相類似，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞因子水平都要高于CHS組。
　　2、CHS組大鼠外周血及脾臟中Tregs比例隨時(shí)間推移均呈逐漸增加趨勢，在發(fā)病之后的前12h或24h低于N-Control組，在24h之后均高于N-Control組。EHS組大鼠外周血及脾臟中Tre

7、gs比例隨時(shí)間推移呈逐漸降低趨勢，外周血中Tregs比例在0h略高于N-Control組，之后均低于N-Control組，脾臟中Tregs比例在前12h時(shí)均高于N-Control組，在24h及以后均低于N-Control組。
　　3、CHS組大鼠脾臟中Tregs凋亡的比例呈逐漸下降的趨勢，CHS組Tregs凋亡的比例在前12h略高于N-Control組，24h之后開始低于N-Control組。EHS組大鼠脾臟中Tregs凋亡比例呈

8、逐漸增高的趨勢，在各時(shí)間點(diǎn)均高于N-Control組。
　　結(jié)論:1、CHS與EHS組大鼠在發(fā)病早期促炎因子與抗炎因子均大量釋放，EHS組大鼠在發(fā)病早期促炎反應(yīng)及抗炎反應(yīng)的水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)都強(qiáng)于CHS組。2、CHS組大鼠在發(fā)病早期外周血及脾臟即出現(xiàn)Tregs比例逐漸升高的趨勢，與脾臟中Tregs的凋亡率相符合，表明Tregs在CHS大鼠發(fā)病早期可能已經(jīng)參與了免疫抑制反應(yīng)。3、EHS組大鼠發(fā)病早期外周血及脾臟Tregs比例呈逐漸降低